商品介紹:
Ro48-8071fumarate是氧化鯊烯環(huán)化酶(Oxidosqualene cyclase)抑制劑,IC50約為6.5nM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:189197-69-1 純度:99.36% 分子量:564.44 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
氧化鯊烯環(huán)化酶抑制劑 | Ro 48-8071 fumarate | 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg | 1~3天 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時,加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
球孢白僵菌堿性蛋白1樣蛋白抗體Anti-CYP11A1 Antibody正五聚蛋白3(PTX3)
燼灰土類芽孢桿菌E3泛蛋白連接144A抗體Anti-CYP11B1 Antibody正輔因子4(PC4)
樹舌靈芝(平蓋靈芝)轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子RFX4抗體Anti-CYP11B1/C11B2/CYP11B2 Antibody整合連鎖激(ILK)
枯草芽孢桿菌Rab溶體相互作用蛋白樣2抗體Anti-CYP19A1 Antibody整合關(guān)聯(lián)蛋白(IAP)
大腸埃希氏菌12號染色體開放閱讀框52抗體Anti-CYP17A1 Antibody整合β8(ITGβ8)
Maritalea myrionectae梅克爾憩室綜合征相關(guān)蛋白5抗體Anti-CYP19A1 Antibody整合β7(ITGβ7)
杰丁畢赤酵母β1,3-N-乙酰糖基轉(zhuǎn)移抗體Anti-CYP17A1 Antibody整合β6(ITGβ6)
白囊耙齒菌RAB3-GTP激活蛋白催化亞單位1抗體Anti-CYP19A1 Antibody整合β5(ITGβ5)
灰略紅鏈霉菌RAB3-GTP激活蛋白催化亞單位2抗體Anti-CYP1A1 Antibody整合β4(ITGβ4)
鮑氏桑黃維甲誘導(dǎo)蛋白1抗體Anti-CYP19A1 Antibody整合β3(ITGβ3)
長野本森頓酵母環(huán)指蛋白13抗體Anti-CYP1A1 Antibody整合β2(ITGβ2)
米曲霉環(huán)指蛋白15抗體Anti-CYP1A2 Antibody整合β1(ITGβ1)
蠟狀芽孢桿菌金屬蛋白抑制因子RECK抗體Anti-CYP1A1 Antibody(PB0573)整合αV(ITGαV)
羅爾細(xì)薄菌視黃受體應(yīng)答蛋白3抗體Anti-CYP1B1 Antibody(PB0575)整合αM(ITGαM)
Phoma medicaginis var. medicaginis視黃受體應(yīng)答蛋白1抗體Anti-CYP21A1 Antibody整合αD(ITGαD)
雙孢畢赤酵母環(huán)指蛋白128抗體Anti-CYP24A1 Antibody整合α9(ITGα9)
根瘤菌Rhizobium│sp. 質(zhì)量規(guī)格:0.98
鏈格孢Alternaria│sp. 質(zhì)量規(guī)格:0.99
黑曲霉Aspergillus│niger 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
氧化鯊烯環(huán)化酶抑制劑硬結(jié)節(jié)桿 RaKa-Ray培養(yǎng)基葡萄糖依賴性胰島釋放多肽Elisa
蛇孢霉屬 3-氨基-4-基吡唑葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白2Elisa
發(fā)酵畢赤酵母 HC瓊脂基礎(chǔ)前列環(huán)Elisa
冬蟲夏草 改良LETHEEN瓊脂基礎(chǔ)前列腺E2Elisa
*林肯鏈霉 [2-[2-(Fmoc-氨基)乙氧基]乙氧基]乙酸羥甲基戊二酸單酰Elisa
金黃色葡萄球金黃亞種 TAT肉湯熱休克蛋白20Elisa
檸檬色游動球 YNB培養(yǎng)基熱休克蛋白70Elisa
葉點霉屬 去氧膽酸鹽枸櫞酸鹽瓊脂乳鐵蛋白Elisa
乳桿屬 3,4,7,8-四甲基-1,10-菲羅啉狀腺原氨酸Elisa
柔嫩艾美耳球蟲 葡萄球選擇性瓊脂110三葉因子3Elisa
羅丹塞伯林德納氏酵母 甘露卵黃培養(yǎng)基基礎(chǔ)色上皮衍生因子Elisa
粉紅寄生 改良Giolitti-Cantobi肉湯腎上腺Elisa
香菇 (R)-(+)-碳酸烯酯生長分化因子9Elisa
雙氮纖維單胞 TMP瓊脂培養(yǎng)基生長Elisa
變天藍(lán)鏈霉 EF-18瓊脂生長釋放肽Elisa