以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
商品介紹:
TAK-715是p38MAPK選擇性抑制劑,IC50為7.1nM,對p38γ/δ,JNK1,ERK1,IKKβ,MEKK1和TAK1無抑制性。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:303162-79-0 純度:99.93% 分子量:399.51 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時,加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
鹽魯拉西英文名稱: Silica gel for column chromatography原鈣粘附蛋白α4抗體包裝1g
英文名稱: Silica gel for column chromatography原鈣粘附蛋白α5抗體包裝25g
米帕明/咪英文名稱: Silica gel for column chromatography原鈣粘附蛋白α9抗體包裝5g
鹽羅英文名稱: Silica gel for column chromatography原鈣粘附蛋白α7抗體包裝25g
鹽羅替戈汀英文名稱: Silica gel for column chromatography原鈣粘附蛋白α8抗體包裝5g
鹽洛貝林英文名稱: Silica gel for column chromatography絲蛋白10抗體包裝1g
鹽美金剛英文名稱: Silicic acid hydrate原鈣粘蛋白12抗體包裝25g
鹽美托咪定英文名稱: Silicon monoxide前列腺性磷抗體包裝5g
鹽納洛英文名稱: Silicotungstic acid hydrate缺陷性分配同源物α抗體包裝1g
鹽萘唑啉英文名稱: Silver acetate原鈣粘蛋白1抗體包裝25g
鹽英文名稱: Silver chloride造血干抗原CD133相關(guān)蛋白抗體包裝5g
鹽帕洛諾司瓊英文名稱: Silver metavanadate酪蛋白激6/腫瘤激抗體包裝100g
鹽侖西平英文名稱: Silver powder表觀抑制因子Polycomb家族成員PCGFl蛋白抗體包裝25G
鹽羅匹英文名稱: Sodium 5-nitroguaiacolate原鈣粘蛋白介導(dǎo)的PCDHαC2受體抗體包裝1g
鹽唑英文名稱: Sodium benzenesulfinate小鼠抗p21激活激4抗體包裝250mg
穿孔艾美耳球蟲Eimeria│perforans 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,BR廣譜角蛋白試劑盒鹽洛美沙星;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書
鏈霉菌Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98.5%,標(biāo)準(zhǔn)品胱抑SN試劑盒磺吡啶;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書
角磷白鵝膏Amanita│solitania 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,B-Raf突變抑制劑胱抑F試劑盒磺鄰二氧嘧啶;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書
p38MAPK抑制劑(TAK-715)轉(zhuǎn)鐵蛋白受體2抗體(2R,3S)-3-(酰)-2-羥乙酯 (紫杉側(cè)鏈) BENZYLOXYPHENYLISOSERINE ETHYLESTER,N-(P)Human, Mouse, Rat
腫瘤壞死因子受體超家族成員13B抗體異硫芐酯 BENZYL ISOTHIOCYANATE(SG)Human, Mouse, Rat
Toll樣受體8抗體6-芐腺嘌呤 BENZYLAMINOPURINE, 6-(RG)Human, Mouse, Rat
胸腺抗體6-芐腺嘌呤 BENZYLAMINOPURINE, 6-(RG)Human, Mouse, Rat
α微管蛋白乙酰轉(zhuǎn)移1抗體肉桂芐酯 BENZYL CINNAMATE(P)Human, Mouse, Rat
TANC1蛋白抗體香檸檬烯 BERGAPTEN(SH)Human, Mouse, Rat
遺傳性耳聾β-tectorin抗體香檸檬烯 BERGAPTEN(SH)Human
谷酰轉(zhuǎn)2抗體香檸檬亭 BERGAPTEN(P)Human, Mouse, Rat
絲/蘇蛋白激TNN13K抗體香檸檬亭 BERGAPTEN(P)Human, Mouse