M2亞基抑制劑(Triapine)公司正在出售的產(chǎn)品：A Raf(phospho Ser214)/FITC 熒光標(biāo)記化A-Raf抗體IgG殺蟲(chóng)單 分析標(biāo)準(zhǔn)品
A Raf/ARAF/FITC 熒光標(biāo)記A-Raf抗體IgG戊唑 分析標(biāo)準(zhǔn)品，99%
Phospho-A Raf (Ser299) /FITC 熒光標(biāo)記化A-Raf抗體IgG苯磺隆 分析標(biāo)準(zhǔn)品，95%
Phospho-A Raf (Ty

以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹：

商品介紹：

公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

操作步驟：

1. 樣品染色

1) 將Binding Buffer（10×）稀釋成1×Binding buffer工作液備用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml無(wú)菌去離子水）。

2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。

對(duì)于貼壁細(xì)胞，要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞，胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短，最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí)，加入細(xì)胞培養(yǎng)液，將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái)，轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。

3) 收集細(xì)胞后，加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌，離心收集細(xì)胞，共洗滌兩次。

4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重懸細(xì)胞，使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。

5) 吸取100μl細(xì)胞懸液（細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，輕輕混勻，室溫避光孵育15min。

2. 樣品檢測(cè)

1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè)：

染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)（1小時(shí)內(nèi)檢測(cè)）。

建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組，正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門(mén)的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析，繪制雙色散點(diǎn)圖（two-color dot plot），F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo)，PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí)，活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光，早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光，晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>

2) 熒光顯微鏡檢測(cè)：

染色孵育后涂片，顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞，細(xì)胞核顯示紅色，膜上有綠色光環(huán)。
根癌土壤桿菌熒光Cy3標(biāo)記猴IgGAnti-INHBC Antibody人抗乙型肝炎病表面抗體(HBsAb)

白馬勃熒光Cy3標(biāo)記猴IgMAnti-INSL4 Antibody人抗乙型肝炎病表面抗體(HBsAb)

弗氏檸檬桿菌熒光Cy3標(biāo)記小鼠IgMAnti-IP6K2 Antibody人抗乙型肝炎病e抗體(HBeAb)

雜色曲霉熒光Cy3標(biāo)記豬IgGAnti-INTS2 Antibody人抗乙型肝炎病e抗體(HBeAb)

長(zhǎng)雙歧桿菌長(zhǎng)亞種熒光Cy3標(biāo)記水貂IgGAnti-IPO9 Antibody人抗流行性出血熱病抗體IgM (EHF)

平臍蠕孢菌熒光Cy3標(biāo)記兔IgMAnti-IPMK Antibody人抗流行性出血熱病抗體IgM (EHF)

杏鮑菇熒光Cy3標(biāo)記大鼠IgMAnti-IPPK Antibody人抗狂犬病抗體(anti-RV)

豇豆慢生根瘤菌熒光Cy3標(biāo)記重組人白介-1受體拮抗劑Anti-IPPK Antibody人抗狂犬病抗體(anti-RV)

巴氏微桿菌熒光Cy3標(biāo)記血藍(lán)蛋白Anti-IRF1 Antibody人抗甲型肝炎病IgM抗體(anti-HAV)

德沃斯氏菌熒光Cy3標(biāo)記雞卵白蛋白Anti-IQCB1 Antibody人抗甲型肝炎病IgM抗體(anti-HAV)

假單胞菌屬熒光Cy3標(biāo)記人血白蛋白Anti-IRF4 Antibody人抗甲型肝炎病IgG抗體(anti-HAV)

擬粉紅鎖擲孢酵母熒光Cy3標(biāo)記胰糜蛋白Anti-IQGAP3 Antibody人抗甲型肝炎病IgG抗體(anti-HAV)

硫磺菌Alexa Fluor 555標(biāo)記羊IgG(流式同型對(duì)照)Anti-IRS1 Antibody人抗副流感病IgM抗體(anti-PIV IgM)

植物乳桿菌植物亞種Alexa Fluor 555標(biāo)記大鼠IgG(流式同型對(duì)照)Anti-IRX1 Antibody人抗副流感病IgM抗體(anti-PIV IgM)

科大百平（平菇類(lèi)）熒光PE-Cy7標(biāo)記兔IgG(流式同型對(duì)照)Anti-IRX2 Antibody人抗丁型肝炎病抗體(anti-HDV)

淡黑假黑盤(pán)菌辣根過(guò)氧化物標(biāo)記生物Anti-IRX3 Antibody人抗丁型肝炎病抗體(anti-HDV)

環(huán)指蛋白87金頭曲霉人套細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞

環(huán)指蛋白44抗體無(wú)殼曲霉人前B細(xì)胞白血病細(xì)胞

環(huán)指蛋白86糙孢曲霉人彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞

環(huán)指蛋白2抗體洋蔥曲霉人白血病細(xì)胞
M2亞基抑制劑(Triapine)弗雷德里克斯堡假單胞 Procumbide

奶酪發(fā)酵小短桿 prim-O-Glucosylangelicain

盤(pán)長(zhǎng)孢狀盤(pán)孢 前異菖蒲烯二

大腸埃希 羅漢松黃酮 A.

擬層孔 p-Menth-8-ene-1,2-diol

巴貝斯蟲(chóng)（青海剛察株） 雞蛋花甙

枯草芽孢桿 闊葉酮

爪哇根霉 Platyphyllenone

季也蒙假絲酵母 匹西狄A

嗜低溫游動(dòng)微 Pisatin

綠產(chǎn)色鏈霉 Piptocarphin A

乳粉  單核增生李斯特氏（陰性）  Piperlotine D

澳型核果褐腐病 Piperlotine C

澳型核果褐腐病 Piperenone

禾谷鐮孢 松柏酸