以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
中文名稱(chēng) | 英文名稱(chēng) | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
sPLA抑制劑(Varespladib) | Varespladib | 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg | 1~3天 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
LY315920(Varespladib)是高活性的人非胰腺分泌磷脂酶A2(sPLA)選擇性抑制劑,IC50為7nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):172732-68-2 別名:LY315920 純度:98.75% 分子量:380.39 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門(mén)的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
鹽帕他莫英文名稱(chēng): Potassium hydrogen tartrate磷酯Cβ2抗體包裝1g
鹽維林英文名稱(chēng): Potassium O-ethyl xanthate硫氧還蛋白過(guò)氧化物Ⅱ/巰基抗氧化蛋白抗體包裝250mg
鹽英文名稱(chēng): Potassium oleate磷脂酰肌激(PI3Kβ)抗體包裝5g
鹽達(dá)泊(混旋)英文名稱(chēng): Potassium phosphate, dibasic, trihydrate磷脂磷2結(jié)構(gòu)域3抗體包裝100g
鹽達(dá)泊(右旋)英文名稱(chēng): Potassium phosphate, tribasic trihydrate胞質(zhì)分裂調(diào)控蛋白1抗體包裝500g
鹽氮卓斯汀英文名稱(chēng): Potassium silicate hydrate磷化蛋白磷2A(PP2Aα)抗體包裝5mg
鹽地芬尼多英文名稱(chēng): Potassium stearate石骨癥相關(guān)蛋白PLEKHM1抗體包裝1g
鹽丁英文名稱(chēng): Potassium tartrate, hydrate血小板白C激底物同源結(jié)構(gòu)域M2抗體包裝25g
鹽度洛英文名稱(chēng): Potassium lurite血小板白C激底物同源結(jié)構(gòu)域M3抗體包裝5g
鹽英文名稱(chēng): Potassium tetraoxalate dehydrate多腺苷二磷多聚抗體(N端)包裝1g
鹽多沙普侖英文名稱(chēng): Potassium thiosulfate酪磷PTPδ抗體 蛋白酪磷D受體抗體包裝5g
鹽伐昔洛韋/鹽萬(wàn)乃洛韋英文名稱(chēng): Potassium titanyl oxalate ,dehydrate鈣粘蛋白相關(guān)神經(jīng)受體8抗體包裝1g
鹽非那吡啶;3-基偶氮-2,6-二基吡啶鹽鹽英文名稱(chēng): p-Phthaldehyde原鈣粘附蛋白18抗體包裝5g
鹽非索非那定英文名稱(chēng): Propyl red原鈣粘附蛋白20抗體包裝1g
鹽芬戈莫德英文名稱(chēng): Pyrazole原鈣粘附蛋白8抗體包裝25g
絲蓋口蘑Tricholoma│inocybeoides A. Pearson 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品過(guò)氧化物體增殖激活物受體γ輔激活因子1α試劑盒諾沙星;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書(shū)
青霉菌屬菌種Penicillium│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,BR,可用于培養(yǎng)過(guò)氧化氫試劑盒氧沙星;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書(shū)
小葉三點(diǎn)金根瘤菌Rhizobium│sp. 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品果糖二磷縮A試劑盒磺噠;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書(shū)
sPLA抑制劑(Varespladib)轉(zhuǎn)錄因子蛋白SIM1抗體吉拉爾特試劑T Girard's Reagent T >98.0%(T)Human, Mouse, Rat
核轉(zhuǎn)錄因子SOX14抗體無(wú)水甜菜 Betaine Anhydrous>97.0%(T)Human, Mouse
信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子1抗體無(wú)水甜菜 Betaine Anhydrous>97.0%(T)Human, Mouse, Rat
核轉(zhuǎn)錄因子SOX6抗體鈹試劑 III Beryllon IIIHuman, Mouse, Rat
核轉(zhuǎn)錄因子SOX8抗體鈹試劑 III Beryllon IIIHuman, Mouse, Rat
STAC1蛋白抗體鈹試劑 II Beryllon IIHuman, Mouse
亞砷鹽相關(guān)蛋白抗體鈹試劑 II Beryllon IIHuman
雙鏈RNA結(jié)合蛋白Staufen2抗體硫黃連水合物 Berberine Sulfate Hydrate>98.0%(LC&T)Human
溶質(zhì)載體家族蛋白22成員5抗體硫黃連水合物 Berberine Sulfate Hydrate>98.0%(LC&T)Human, Mouse, Rat