以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
PI3K抑制劑(GDC-0980) | GDC-0980 | 1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg | 1~3天 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
GDC-0980是一種有效的PI3K抑制劑,能夠抑制PI3Kα/β/δ/γ的活性,IC50值為5nM/27nM/7nM/14nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):1032754-93-0 別名:Apitolisib;GNE 390;RG 7422 純度:99.13% 分子量:498.6 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
貝倫格葡萄座腔菌梨生?;?/span>Alexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗人IgMAnti-TTR Antibody(PB0715)端粒延長(zhǎng)分子2(O2)
淺灰白鏈霉菌FITC標(biāo)記的兔抗人分泌型IgAAnti-TTR Antibody(PB0782)端粒關(guān)聯(lián)蛋白1(TEP1)
食品安全快速檢測(cè)箱 高檔配置羅丹明標(biāo)記的兔抗人分泌型IgAAnti-TUB Antibody端粒保護(hù)1同源物(POT1)
耐輻射奇球菌Alexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗人分泌型IgAAnti-TUBA1A/TUBA1B/TUBA1C Antibody蕈堿型受體M5(CHRM5)
運(yùn)動(dòng)發(fā)酵單胞菌運(yùn)動(dòng)亞種APC標(biāo)記的兔抗人分泌型IgAAnti-TXNIP Antibody蕈堿型受體M4(CHRM4)
小鏈孢菌Alexa Fluor 350標(biāo)記的兔抗人分泌型IgAAnti-TXN2 Antibody蕈堿型受體M3(CHRM3)
短小芽孢桿菌Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗人分泌型IgAAnti-TXN Antibody蕈堿型受體M2(CHRM2)
大腸埃希菌Cy5標(biāo)記的兔抗人分泌型IgAAnti-TXNRD1 Antibody蕈堿型受體M1(CHRM1)
球毛殼菌Cy5.5標(biāo)記的兔抗人分泌型IgAAnti-TXNRD2 Antibody兜甲蛋白(LOR)
草木樨中華根瘤菌Cy7標(biāo)記的兔抗人分泌型IgAAnti-TXNRD2 Antibody動(dòng)力蛋白軸絲重鏈11(DNAH11)
蘇云金芽孢桿菌PE標(biāo)記的兔抗人分泌型IgAAnti-TYRO3 Antibody動(dòng)力蛋白激活蛋白6(DCTN6)
大腸埃希菌膠體金標(biāo)記的兔抗人分泌型IgAAnti-TYRO3 Antibody動(dòng)力蛋白激活蛋白5(DCTN5)
桔橙鏈霉菌APC標(biāo)記的兔抗小鼠IgG-FcAnti-TYRO3 Antibody動(dòng)力蛋白激活蛋白4(DCTN4)
土曲霉Alexa Fluor 350標(biāo)記的兔抗小鼠IgG-FcAnti-UBA1 Antibody動(dòng)力蛋白激活蛋白3(DCTN3)
假單胞菌Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗小鼠IgG-FcAnti-U2AF2 Antibody動(dòng)力蛋白激活蛋白2(DCTN2)
假單胞菌Alexa Fluor 555標(biāo)記的兔抗小鼠IgG-FcAnti-UBA3 Antibody動(dòng)力蛋白激活蛋白1(DCTN1)
PDZ結(jié)構(gòu)域PDZK5A蛋白抗體血鏈球菌小鼠小腸組織提取物
蛋白酪磷H1抗體醋醋桿菌小鼠直腸組織提取物
核纖層蛋白A相關(guān)結(jié)構(gòu)蛋白1抗體伊氏李斯特氏菌小鼠腸組織提取物
PCID2蛋白抗體英諾克李斯特氏菌小鼠氣管和支氣管組織提取物
PI3K抑制劑(GDC-0980)粉紅聚端孢 新苦參
諾維氏梭 新苦參酮
臭曲霉 吳茱萸苷
惡疫霉* 大花雙參苷A
埋藏曲霉 去氫齒孔酸
熱帶假絲酵母 二氫青蒿酸
蘇云金芽孢桿 伊貝堿苷A;辛貝甲-3-D-葡萄糖苷
展示接霉 重樓皂苷D
半裸鐮孢 重樓皂苷H
阿富汗鏈霉 重樓皂苷V
釀酒酵母 苦參K
熱帶假絲酵母 苦參R
球孢白僵 苦參O
博伊丁假絲酵母 苦參Q
運(yùn)動(dòng)節(jié)桿 苦參L