以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
ERK抑制劑(FR180204) | FR 180204 | 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg | 1~3天 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
FR180204是一種選擇性的,ERK的ATP競爭性抑制劑,對ERK1和ERK2的Ki值分別為0.31μM和0.14μM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:865362-74-9 純度:99.60% 分子量:327.34 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時(shí)內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
蘋果鏈格孢急性髓白血病1蛋白抗體Anti-CX3CL1 Antibody中心體蛋白2(CETN2)
Pseudomonas coleopterorum指狀蛋白RET抗體Anti-CXCL1 Antibody中心體蛋白1(CETN1)
蘇云金芽胞桿菌印第安那亞種環(huán)指蛋白39抗體Anti-CX3CL1 Antibody中心體BRCA2相互作用蛋白(CNTROB)
中國臺(tái)灣根霉RAS癌基因家族蛋白RAB40B抗體Anti-CUL5 Antibody中心粒外周物質(zhì)1(PCM1)
葡萄座腔菌磷化Raf激抑制蛋白抗體Anti-CXADR Antibody中心粒旁(PCNT)
干草鞘單胞菌肌相關(guān)蛋白1抗體Anti-CXCL1 Antibody中腦星形膠質(zhì)來源神經(jīng)營養(yǎng)因子(MANF)
Marinobacter excellensRAS癌基因家族蛋白RAB40A抗體Anti-CXCL10 Antibody中腦核仁蛋白(MIDN)
陰溝腸桿菌溶解亞種RAS癌基因家族蛋白RAB40C抗體Anti-CXCL10 Antibody中間絲蛋白(SYNC)
淡紫擬青霉松弛3抗體Anti-CXCL12 Antibody中間密度脂蛋白(IDL)
葉片微桿菌類風(fēng)濕因子抗體Anti-CXCL10 Antibody中間α-球蛋白抑制因子H5(ITIH5)
黑靈芝視網(wǎng)膜色上皮特異性蛋白65抗體Anti-CXCL12 Antibody中間α-球蛋白抑制因子H4(ITIH4)
釀酒酵母RhoB蛋白抗體Anti-CXCL12 Antibody中間α-球蛋白抑制因子H3(ITIH3)
穿孔艾美耳球蟲G蛋白偶聯(lián)受體135/松弛受體3抗體Anti-CXCL16 Antibody中間α-球蛋白抑制因子H2(ITIH2)
葡萄座腔菌絲蛋白激1抗體Anti-CXCL13 Antibody中間α-球蛋白抑制因子H1(ITIH1)
陰溝腸桿菌環(huán)指蛋白41抗體Anti-CXCL13 Antibody(PB0726)質(zhì)膜膜泡關(guān)聯(lián)蛋白(PLVAP)
島生異擔(dān)子菌核基質(zhì)蛋白21抗體Anti-CXCL2 Antibody酯D(ESD)
米曲霉Aspergillus│oryzae 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR
大腸埃希菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
40183=ATCC23968=CBS951.68=IFO12920=INA資源名稱: 淺紫鏈霉菌 質(zhì)量規(guī)格:0.98
ERK抑制劑(FR180204)淡紫擬青霉 MIO培養(yǎng)基降鈣Elisa
巴西果小克銀漢霉 -7-羧酸結(jié)合珠蛋白Elisa
暗孢小克銀漢霉 D/E中和肉湯金屬硫蛋白Elisa
痤瘡酸桿 D/E中和瓊脂精氨酸Elisa
孟氏假單胞 BCYE瓊脂基礎(chǔ)抗肌動(dòng)蛋白抗體Elisa
釀酒酵母 氧化三培養(yǎng)基可溶性間粘附分子1Elisa
檬果炭疽病 CVT瓊脂可溶性血管內(nèi)皮蛋白C受體Elisa
淺黃隱球酵母 Iron瓊脂藍(lán)耳病抗體Elisa
結(jié)腸彎曲 STAA培養(yǎng)基酪氨酸激AElisa
奈良鏈霉 發(fā)光培養(yǎng)基酪氨酸激BElisa
大腸埃希氏桿 產(chǎn)組培養(yǎng)基酪氨酸激CElisa
柱孢綠僵 (腦)心浸液瓊脂酪酪肽Elisa
西方伊薩酵母 大腸群快檢紙片(水源水)粒巨噬集落激因子Elisa
金黃殼囊孢 大腸群快檢紙片(食品)磷酸化酪氨酸激2Elisa
紅曲紅曲 TCH(噻吩-2-羧酸酰肼)流行性腹瀉病抗體Elisa