以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
STAT3抑制劑 | Homoharringtonine | 1mL(10mM)|10mg|50mg | 1~3天 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
Homoharringtonine是一種細(xì)胞毒性生物堿,作用于抗Gefitinib的肺癌細(xì)胞,誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,且通過IL-6/JAK1/STAT3信號通路來抑制STAT3。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:26833-87-4 別名:Omacetaxine mepesuccinate;HHT 純度:98.71% 分子量:545.62 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時(shí)內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
雞松茸鼻咽癌癌基因抗體Human PALMD ELISA Kit絲蛋白(PRSS)
產(chǎn)紫青霉白血病抑制因子受體抗體Human PAN2 ELISA Kit絲/蘇激24(STK24)
“冰川鹽單胞菌"核纖層蛋白A抗體Human PAG1 ELISA Kit絲/蘇蛋白磷(STK)
蠟狀芽孢桿菌核纖層蛋白B抗體(核膜標(biāo)志物)Human P62/SQSTM1(Sequestosome-1) ELISA Kit絲/蘇蛋白激PAK4(PAK4)
糞生花褶傘核纖層蛋白A/C抗體Human PAFAH1B3 ELISA Kit絲/蘇蛋白激B-raf(BRAF)
松杉靈芝LRIG2抗體Human PNOC(Prepronociceptin) ELISA Kit水蛭(HRD)
淡紫擬青霉淋巴增強(qiáng)因子-1抗體Human P5CS ELISA Kit水閘蛋白14(CLDN14)
病研所芽孢桿菌LRIG1抗體Human PAFAH2(Plaet-activating factor acetylhydrolase 2) ELISA Kit水通道蛋白5(AQP-5)
冷湖黃桿菌LRIG3抗體Human P62/SQSTM1(Sequestosome-1) ELISA Kit水通道蛋白4抗體(AQP-4 Ab)
球孢白僵菌肝腸鈣粘連蛋白抗體Human PAG1 ELISA Kit水通道蛋白4(AQP-4)
釀酒酵母透明質(zhì)受體抗體Human PABPC4 ELISA Kit水通道蛋白4(AQP4)
總狀共頭霉17號染色體開放閱讀框82抗體Human PACSIN1 ELISA Kit水通道蛋白3(AQP-3)
扭托甲基桿菌轉(zhuǎn)錄因子LMCD1抗體Human PACS2 ELISA Kit水通道蛋白2(AQP-2)
大球蓋菇淋巴抗原76抗體Human PACSIN2 ELISA Kit水通道蛋白2(AQP2)
土曲霉富含亮重復(fù)序列LRP15抗體Human PACSIN3 ELISA Kit水通道蛋白1(AQP-1)
齒孢青霉富含亮重復(fù)跨膜神經(jīng)元蛋白1抗體Human OXCT2 ELISA Kit水通道蛋白1(AQP1)
銅綠假單胞菌Pseudomonas│aeruginosa 質(zhì)量規(guī)格:>90.0%(HPLC)朝藿定B
阿姆斯特丹散囊菌Eurotium│amstelodami 質(zhì)量規(guī)格:>95.0%(HPLC)朝藿定A
海洋桿菌Pontibacter│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(T)獐牙菜苦苷
STAT3抑制劑ATCC 34877 鄰溴苯IκB激-βElisa
毛霉屬 2-巰基苯并咪唑高鐵肌紅蛋白還原Elisa
卷枝毛霉卷枝變型 雙酮-D-葡萄糖相關(guān)糖蛋白1Elisa
原玻璃蠅谷氨酸桿 三苯血吸蟲Elisa
短波單胞屬 乙合氨三聚體萊姆病IgG抗體Elisa
沼澤粘液桿 2,6-二甲基萘2,3-二磷酸甘油酸Elisa
尖孢鐮孢 6-氨基喹啉Ⅰ型膠原C端肽Elisa
根際考克氏 2-溴萘Ⅰ型膠原N末端肽Elisa
高山腐霉 鄰-(2,3,4,5,6-五氟芐基)羥鹽酸鹽Ⅱ型膠原C端肽Elisa
芽胞桿 7,12-二并[a]蒽Ⅳ型膠原蛋白Elisa
鏈孢囊 2,6-二乙基苯(DEA)CD30分子Elisa
大豆慢生根瘤 2-氨基-5-溴CXC趨化因子配體16Elisa
滑菇 4--2-氟苯C-反應(yīng)蛋白Elisa
黑曲霉 8-氨基喹啉C肽Elisa
豌豆根瘤 鄰溴苯甲D二聚體Elisa