以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
商品介紹:
IOX1是2OG oxygenase高效廣譜抑制劑,包括JmjC去甲基化酶家族,對(duì)KDM4A和KDM3A的IC50值分別為0.6uM和0.1uM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):5852-78-8 純度:97.04% 分子量:189.17 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長(zhǎng)或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
糞腸球菌腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子2抗原Anti-ELOVL1 Antibody人腫瘤標(biāo)志物(CA724)
炭黑曲霉腫瘤壞死因子受體相關(guān)蛋白3抗原Anti-ELOVL1 Antibody人腫瘤標(biāo)志物(CA724)
釀酒酵母腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子6抗原Anti-ELOVL4 Antibody明膠相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(NGAL)
黑曲霉腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體/凋亡2配體抗原Anti-ELOVL3 Antibody明膠相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(NGAL)
三葉草根瘤菌端粒體復(fù)制結(jié)合因子1抗原Anti-ELOVL4 Antibody人小肺癌抗原(LTA)
深紅酵母TRIM32抗原Anti-ELOVL5 Antibody人小肺癌抗原(LTA)
褐囊蜜環(huán)菌原肌球蛋白抗原Anti-ELOVL6 Antibody人肺癌標(biāo)志物DR-70(DR-70TM)
秦氏蜜環(huán)菌生精凋亡相關(guān)基因4抗原Anti-ELP2 Antibody人肺癌標(biāo)志物DR-70(DR-70TM)
硬水黃桿菌CIDEB抗原Anti-ELOVL5 Antibody人胚胎性硫糖蛋白抗原(FSA)
肉紅鐮孢Tsg101抗原Anti-EMX1 Antibody人胚胎性硫糖蛋白抗原(FSA)
大腸埃希菌促甲狀腺受體抗原Anti-EMX1 Antibody人本周蛋白(BJP)
黑曲霉自噬微管相關(guān)蛋白輕鏈3抗原Anti-EMB Antibody人本周蛋白(BJP)
密歇根鏈霉菌*肺癌腫瘤阻抑基因1抗原Anti-ENAH Antibody人癌胚鐵蛋白(CEF)
葡萄座腔菌甲狀腺核轉(zhuǎn)錄因子-1抗原Anti-EMX2 Antibody人癌胚鐵蛋白(CEF)
枯草芽孢桿菌枯草亞種微管蛋白-γ抗原Anti-ENO2 Antibody人鱗狀癌相關(guān)抗原(SCCAg)
短小芽孢桿菌TWIST蛋白抗原Anti-ENPP3 Antibody人鱗狀癌相關(guān)抗原(SCCAg)
轉(zhuǎn)錄因子SOX17抗體平展米曲霉(米曲霉平展變種)人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞
分選連接蛋白5抗體裂殖壺菌人胰腺上皮樣癌細(xì)胞
分選連接蛋白2抗體意大青霉人喉癌上皮細(xì)胞
分選連接蛋白7抗體指狀青霉人惡性黑色瘤瘤株
2OG oxygenase抑制劑(IOX1)阿維丁鏈霉 阿里辛,馬蹄葉堿,阿立新
變色農(nóng)球 牛蒡子 B
乳酸克魯維酵母 Aporheine
耐久腸球 alpha-Terthienylmethanol
氏黃褐桿 Akuammigine
茶褐盤 Agathadiol diacetate
油脂酵母 Adynerin
溪谷嗜冷桿 9-O-Acetyl-4,4'-di-O-methyllaric
柄小鐮孢 9-Epiblumenol B
深黃小毛霉 8-Prenylkaempferol
短小芽孢桿 2-(4-苯氧基)-2-甲基酸
產(chǎn)溶桿 5-氮胞苷
枯草芽孢桿 苯甲?;驶?/span>
枯草芽孢桿 萘黃酮
解脂假絲酵母 N,N-二乙基羥