公司產(chǎn)品僅用于科研
細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面:
細(xì)胞生物學(xué)的研究?jī)?nèi)容十分廣泛,主要包括:
①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究;
②生物膜與細(xì)胞器的研究;
③細(xì)胞骨架體系的研究;
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控;
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控;
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡);
⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化;
⑧細(xì)胞工程.
產(chǎn)品屬性:
中文名稱:PI4KIIIβ抑制劑(PIK-93)
英文名稱:PIK-93
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg
發(fā)貨周期:1~3天
商品介紹:
PIK-93是一種合成的,有效的PI4KIIIβ抑制劑,IC50值為19nM,同時(shí)可抑制PI3Kγ和PI3Kα的活性,IC50值分別為16nM和39nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):593960-11-3 純度:99.13% 分子量:389.88 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
糙皮側(cè)耳Alexa Fluor 350標(biāo)記的兔抗羊IgMAnti-TOP2A Antibody法尼基轉(zhuǎn)移α(FNTα)
運(yùn)動(dòng)節(jié)桿菌Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗羊IgMAnti- Antibody發(fā)動(dòng)蛋白3(DNM3)
棲土光黑殼Cy3標(biāo)記的兔抗羊IgMAnti-TOLLIP Antibody發(fā)動(dòng)蛋白1(DNM1)
秦氏蜜環(huán)菌Cy5標(biāo)記的兔抗羊IgMAnti-TOP2A Antibody二酰基甘油(DAG)
短小芽孢桿菌Cy5.5標(biāo)記的兔抗羊IgMAnti-TOR1A Antibody二酰甘油-O-?;D(zhuǎn)移同源物2(DGAT2)
釀酒酵母Cy7標(biāo)記的兔抗羊IgMAnti-TP53BP1 Antibody二酰甘油-O-?;D(zhuǎn)移同源物1(DGAT1)
灰(色)大孢鏈霉菌PE標(biāo)記的兔抗羊IgMAnti-TP53 Antibody(PB0076)二羰基/L-木糖還原(DCXR)
變異白蟻菌生物標(biāo)記的兔抗羊IgMAnti-TP63 Antibody二肽3(DPEP3)
伯克霍爾德菌辣根過(guò)氧化物標(biāo)記的兔抗羊IgMAnti-TP63 Antibody二肽2(DPEP2)
茯苓P0辣根過(guò)氧化物標(biāo)記的兔抗豚鼠IgGAnti-TP73 Antibody二肽基肽Ⅳ(DPP4)
類諾卡氏菌屬膠體金標(biāo)記的兔抗豚鼠IgGAnti-TPH1 Antibody二肽基肽9(DPP9)
藤黃微球菌生物標(biāo)記的兔抗豚鼠IgGAnti-TPH1 Antibody二肽基肽8(DPP8)
銹蘑Cy3標(biāo)記的兔抗豚鼠IgGAnti-TP73 Antibody(PB0232)二肽基肽7(DPP7)
爪甲曲霉Cy5標(biāo)記的兔抗豚鼠IgGAnti-TP63 Antibody(PB0164)二肽基肽6(DPP6)
茶擬盤(pán)多毛孢Cy5.5標(biāo)記的兔抗豚鼠IgGAnti-TPOR/MPL Antibody二肽基肽3(DPP3)
雙氮纖維單胞菌Cy7標(biāo)記的兔抗豚鼠IgGAnti-TPO Antibody二肽基肽10(DPP10)
B淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)成熟蛋白1抗體腸炎沙門(mén)氏菌亞利桑那亞種人卵巢組織提取物
成對(duì)螺旋細(xì)絲蛋白抗體Sphingobiumjaponicum人牙周膜組織提取物
植烷氧化抗體Sphingobiumrhizovicinum人胰腺癌組織提取物
蛋白二硫鍵異構(gòu)P4HB抗體長(zhǎng)赤細(xì)菌人體直腸癌組織提取物
PI4KIIIβ抑制劑(PIK-93)異常威克漢姆酵母 鳳仙萜四苷K
水叢毛單胞 矢車菊黃
節(jié)狀鐮孢厚垣變種 甲基條葉薊; 澤蘭黃
拜科羅爾紅球 馬兜鈴內(nèi)酰A
庫(kù)爾勒海洋桿 齒孔酸; 齒孔酸
乳桿屬 三七
*蛹蟲(chóng)草 20R-人參皂苷Rg2
植物乳桿 丹參酮甲酯
枯草芽孢桿 1,4-二[4-(葡萄糖氧)芐基]-2-異丁基蘋(píng)果酸酯
草莖點(diǎn)霉 去氫紫堇堿
構(gòu)巢裸胞殼 去氫海堿
假單胞 酰D
蘋(píng)果黑腐皮殼 齊墩果酸3-O-beta-D-葡吡喃糖基(1→2)-alpha-L-吡喃阿拉伯糖苷
狐糞青霉 一枝蒿庚; 準(zhǔn)葛爾
毛頭鬼傘(雞腿蘑) 次皂甙元CP6