商品介紹:
PHA-793887是一種有效的,ATP競(jìng)爭(zhēng)性的CDK抑制劑,可抑制Cdk2,Cdk1,Cdk4和Cdk9的活性,IC50值分別為8nM,60nM,62nM和138nM,同時(shí)可抑制糖原合酶激酶3β(GSK-3β),IC50值為79nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):718630-59-2 純度:98.33% 分子量:361.48 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
產(chǎn)品屬性:
中文名稱:CDK抑制劑(PHA-793887)
英文名稱:PHA-793887
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg
發(fā)貨周期:1~3天
公司產(chǎn)品僅用于科研
細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面:
細(xì)胞生物學(xué)的研究?jī)?nèi)容十分廣泛,主要包括:
①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究;
②生物膜與細(xì)胞器的研究;
③細(xì)胞骨架體系的研究;
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控;
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控;
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡);
⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化;
⑧細(xì)胞工程.
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
巴斯德畢赤酵母PE-CY5標(biāo)記的兔抗狗IgGAnti-TNFRSF4 Antibody芳基硫酯E(ARSE)
地衣芽孢桿菌APC標(biāo)記的兔抗狗IgGAnti-TNFRSF4 Antibody芳基硫酯D(ARSD)
單胞菌屬Alexa Fluor 350標(biāo)記的兔抗狗IgGAnti-TNFRSF4 Antibody芳基硫酯B(ARSB)
克魯斯假絲酵母Alexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗狗IgGAnti-TNFRSF4 Antibody芳基硫酯A(ARSA)
糙皮側(cè)耳PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗狗IgGAnti-TNFRSF4 Antibody泛激4(PANK4)
球毛殼菌(可訂購(gòu))PE-Cy7標(biāo)記的兔抗狗IgGAnti-TNFRSF8 Antibody泛激3(PANK3)
綠木霉Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗狗IgGAnti-TNFSF10 Antibody泛激2(PANK2)
副豬嗜血桿菌Alexa Fluor 555標(biāo)記的兔抗狗IgGAnti-TNFSF10 Antibody泛激1(PANK1)
假單胞菌PE-CY5標(biāo)記的兔抗羊IgGAnti-TNFSF11 Antibody泛特異性肽8(USP8)
歧異假絲酵母APC標(biāo)記的兔抗羊IgGAnti-TNFRSF8 Antibody泛羧基端酯L1(UCHL1)
黑曲霉PE-Cy3標(biāo)記的兔抗羊IgGAnti-TNFRSF9 Antibody泛連接E3A(UBE3A)
旋毛殼Alexa Fluor 350標(biāo)記的兔抗羊IgGAnti-TNFSF11 Antibody泛結(jié)合E2C結(jié)合蛋白E2L3(UBE2L3)
黃暗青霉Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗羊IgGAnti-TNFSF12 Antibody泛結(jié)合E2C(UBE2C)
雅致小克銀漢霉Alexa Fluor 555標(biāo)記的兔抗羊IgGAnti-TNFSF13 Antibody泛結(jié)合E2A(UBE2A)
固氮菌Alexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗羊IgGAnti-TNFSF13B Antibody泛交叉反應(yīng)蛋白(UCRP)
繩狀青霉PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗羊IgGAnti-TNFSF13B Antibody泛激活樣蛋白(UBE1L)
3磷肌依賴性蛋白激1抗體渾濁紅球菌人體腦靜脈血管組織提取物
p53結(jié)合蛋白1抗體開(kāi)菲爾乳桿菌人體腦膜組織提取物
腫瘤壞死因子受體相關(guān)蛋白2抗體土白蟻叢毛單胞菌人小腦組織提取物
蛋白調(diào)解因子7抗體韓國(guó)叢毛單胞菌人腦動(dòng)脈血管組織提取物
CDK抑制劑(PHA-793887)金黃殼囊孢 單葡萄糖酸甘草次酸
固囊酵母 波棱酮
聚多曲霉 款冬酮
尖孢鐮孢 絡(luò)石苷元
枝孢霉 絲立尼亭
P7(平菇類) 栝樓萜二
白絲倫茨氏 龍牙楤木皂甙VII
秦氏蜜環(huán) 3-乙?;?beta-乳香酸
釀酒酵母 戈米辛O
白假絲酵母 靈芝內(nèi)酯B
波斯坦沙門氏 黃卡瓦胡椒C
羊蹄甲長(zhǎng)蠕孢 異鼠李-3-O-葡萄糖-7-O-鼠李糖苷
竹針孢座囊 山柰酚-3-槐二糖-7-鼠李糖苷
耐熱芽孢芽孢桿 白頭翁
圓酵毛殼 紫堇米定堿