以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
商品介紹:
本試劑盒應(yīng)用范圍廣,可用于檢測(cè)冷凍或石蠟切片中的細(xì)胞凋亡情況,也可檢測(cè)培養(yǎng)的貼壁細(xì)胞或懸浮細(xì)胞的凋亡情況。 細(xì)胞在發(fā)生凋亡時(shí),會(huì)激活一些DNA內(nèi)切酶,這些內(nèi)切酶會(huì)切斷核小體間的基因組DNA。細(xì)胞凋亡時(shí)抽提DNA進(jìn)行電泳檢測(cè),可以發(fā)現(xiàn)180-200bp的DNA ladder。 TUNEL (TdT mediated dUTP Nick End Labeling) 細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(Alexa Fluor 488)可以用來(lái)檢測(cè)組織細(xì)胞在凋亡晚期過(guò)程中細(xì)胞核DNA的斷裂情況。其原理是在末端脫氧核糖核苷酸轉(zhuǎn)移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT)的作用下,在基因組DNA斷裂時(shí)暴露出的3′-羥基(3′-OH)末端摻入Alexa Fluor 488-12-dUTP,從而可以用熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀檢測(cè)。 Alexa Fluor 488染料穩(wěn)定性更高,信號(hào)更強(qiáng),從而使標(biāo)記物更亮,抗淬滅能力更強(qiáng)。 試劑盒組份: 5×Equilibration Buffer ——————————750μl Alexa Fluor 488-12-dUTP Labeling Mix————100 μl Recombinant TdT Enzyme ——————————20 μl Proteinase K(2 mg/ml)——————————— 40 μl DNase I (1 U/μl)————————————— 5μl 10×DNase I Buffer with MgCl2—————— 100 μl 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期一年。 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門(mén)的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子3(NT3)英文名稱:NT3 ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白64B抗體包裝100g
神經(jīng)型一氧化氮合(NOS1)英文名稱:NOS1 ELISA Kit組蛋白H3-K9基轉(zhuǎn)移抗體包裝25g
神經(jīng)纖維網(wǎng)蛋白1(NRP1)英文名稱:NRP1 ELISA Kit趨化樣因子超家族成員6抗體包裝5g
神經(jīng)纖維2(NF2)英文名稱:NF2 ELISA Kitcornichon樣蛋白抗體包裝100g
神經(jīng)調(diào)節(jié)4(NRG4)英文名稱:NRG4 ELISA KitRas激抑制因子連接增強(qiáng)蛋白1抗體包裝25g
神經(jīng)調(diào)節(jié)1(NRG1)英文名稱:NRG1 ELISA KitRas激抑制因子連接增強(qiáng)蛋白2抗體包裝500g
神經(jīng)肽Y受體Y5(NPY5R)英文名稱:NPY5R ELISA KitRas激抑制因子連接增強(qiáng)蛋白3抗體包裝1g
神經(jīng)肽Y受體Y2(NPY2R)英文名稱:NPY2R ELISA Kit分裂周期2樣蛋白激5抗體包裝250mg
神經(jīng)肽Y受體Y1(NPY1R)英文名稱:NPY1R ELISA KitCD20樣蛋白抗體(造血干4跨膜蛋白3)包裝10MG
神經(jīng)肽S(NPS)英文名稱:NPS ELISA Kit周期蛋白依賴性激CABLES1抗體包裝25g
神經(jīng)肽FF(NPFF)英文名稱:NPFF ELISA Kit分裂周期相關(guān)蛋白3抗體包裝5g
神經(jīng)絲蛋白3(NEF3)英文名稱:NEF3 ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白148抗體包裝5mg
神經(jīng)介S(NMS)英文名稱:NMS ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白153抗體包裝1ml
神經(jīng)介B(NMB)英文名稱:NMB ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白160抗體包裝100mg
神經(jīng)激肽B(NKB)英文名稱:NKB ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白22抗體包裝25mg
芽胞桿菌Bacillus│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,BR,可用于培養(yǎng)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β受體3試劑盒澤瀉 B;Alisol B
鏈霉菌Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β受體2試劑盒澤瀉 A;Alisol A
鏈霉菌屬菌種Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格:> 98%,進(jìn)分,Sigma A2385轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β受體1試劑盒正丁; Butylamine
TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(Alexa Fluor 488)康寧木霉 硫代醋酸S-甲酯血管緊張ⅠElisa
分枝節(jié)桿 丁鹽酸鹽血管緊張ⅡElisa
蠟狀芽孢桿 2-(4-溴-3-氟苯基)-5-丁基-1,3-二惡烷血管緊張Ⅱ受體1Elisa
大腸埃希 4-苯基-1-丁基溴血管緊張Ⅱ受體1抗體Elisa
大腸埃希氏(大腸桿) 噻托溴銨血管緊張Ⅱ受體2抗體Elisa
游動(dòng)微 異喹啉-N-氧化物血管緊張?jiān)璄lisa
暹羅盤(pán)孢 9-芴酮腙血管緊張轉(zhuǎn)化Elisa
產(chǎn)朊假絲酵母 4-丁氧基-2,3-二氟苯酚血管緊張轉(zhuǎn)化2Elisa
費(fèi)希爾曲霉 內(nèi)向-9-甲基-9-氮雜雙環(huán)[3,3,1]壬烷-3-鹽酸鹽血管內(nèi)皮超化因子Elisa
成鏈需鹽桿 硫酸鈷銨六水合物血管內(nèi)皮鈣粘蛋白Elisa
pACYC184 2-溴-4'-苯基乙酰苯血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子AElisa
黃桿 2,6-二氯-N-苯基苯血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子BElisa
四川散斑殼 4,6-二甲氧基-2-甲基嘧啶血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子CElisa
繩索狀芽胞桿 3-羥基-2'-甲基-2-萘苯血管內(nèi)皮蛋白C受體Elisa
膠孢 2-羥基-7-萘磺酸鈉血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子Elisa