以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
英文名稱:Elacridar 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg|200mg|500mg Elacridar是一種有效的P-糖蛋白(P-glycoprotein)和BCRP的抑制劑,常用于癌癥研究。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:143664-11-3 別名:GF120918;GW0918;GG918;GW120918 純度:98.47% 分子量:563.64 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時(shí)內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
擬香味類香味菌磷化GATA結(jié)合蛋白3抗體Human UNC45A ELISA Kit大鼠誘導(dǎo)型一氧化氮合成(iNOS)免疫試劑盒
沙氏芽孢桿菌延伸因子G2抗體Human UQCR ELISA Kit大鼠游離脂肪(FFA)免疫試劑盒
姬松茸*葡糖淀粉抗體Human UNC45B ELISA Kit大鼠游離原卟啉(FEP)免疫試劑盒
釀酒酵母谷酰6-磷果糖轉(zhuǎn)移抗體Human UNC5A ELISA Kit大鼠游離狀腺原(Free-T3)免疫試劑盒
熱帶假絲酵母S轉(zhuǎn)移θ抗體Human UNC5CL ELISA Kit大鼠游離肉堿免疫試劑盒
樟疫霉S轉(zhuǎn)移θ2抗體Human UNC5D ELISA Kit大鼠游離前列腺特異性抗原(fPSA)免疫試劑盒
檸檬色葡萄球菌γ-谷酰轉(zhuǎn)肽6抗體Human UNG ELISA Kit大鼠游離甲狀腺(FT4)免疫試劑盒
閃光須霉顆粒A抗體Human UNKL ELISA Kit大鼠游離睪(F-TESTO)免疫試劑盒
金灰青霉顆粒D/B/E/N/G/F/H抗體Human UQCR ELISA Kit大鼠游離雌三(FE3)免疫試劑盒
紅曲紅曲粒-巨噬集落激因子3受體抗體Human UNC45A ELISA Kit大鼠游離β絨毛膜促性腺激(f-βCG)免疫試劑盒
分枝卷霉血型糖蛋白A/涎糖蛋白抗體Human UNC45B ELISA Kit大鼠幽門螺旋菌IgG(Hp-IgG)免疫試劑盒
溶藻弧菌G蛋白修補(bǔ)結(jié)構(gòu)域蛋白3抗體Human UNC5A ELISA Kit大鼠硬脂酰去飽和1(SCD1)免疫試劑盒
豇豆慢生根瘤菌G蛋白偶聯(lián)受體GPR63蛋白抗體Human UGT8 ELISA Kit大鼠2,3-雙加氧(IDO)免疫試劑盒
豬鏈球菌磷化珠蛋白轉(zhuǎn)錄因子1抗體Human UHMK1 ELISA Kit大鼠抑制結(jié)合蛋白(INHBP)免疫試劑盒
成團(tuán)泛菌G蛋白偶聯(lián)受體109A抗體Human POMT1(Protein O-mannosyl-transferase 1) ELISA Kit大鼠抑制B(INH-B)免疫試劑盒
孟氏假單胞菌G蛋白偶聯(lián)受體15抗體Human UHRF1BP1L ELISA Kit大鼠抑制A(INH-A)免疫試劑盒
蠟樣芽孢桿菌Bacillus│cereus 質(zhì)量規(guī)格:AR,200目,粉末狀,褐色去澤拉木
大腸埃希氏菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格:CP,200目,粉末狀,褐色人參皂苷F3
三葉草根瘤菌Rhizobium│trifolii 質(zhì)量規(guī)格:AR,20-50目萊苞迪甙D
P-糖蛋白和BCRP抑制劑(Elacridar)果生鏈核盤 三(2,2,6,6-四甲基-3,5-庚二酮酸)鈷(III) (metals basis)半纖維Elisa
大腸埃希氏 二羰基乙酰酮銠(I)鈣離子Elisa
釀酒酵母 雙(苯)二鉑(II), Pt min維生B12Elisa
奧氏蜜環(huán) 順-二雙(吡啶基)鉑(II)磷脂酸Elisa
惡臭假單胞 碳雙(三苯基膦)化銥組蛋白乙?;疎lisa
鏈格孢 3-甲氧基氮雜環(huán)丁烷鹽酸鹽脂蛋白脂肪Elisa
大腸埃希 1,3-二溴-5-苯肉堿軟脂酰基轉(zhuǎn)移1Elisa
秀珍菇 2,6-二-3-吡啶酸抗組蛋白抗體Elisa
大腸桿 二氫二苯磷苯基-4-異惡唑血小板生成Elisa
灰色鏈霉灰色亞種 2-溴-2-苯基乙酰苯干因子Elisa
枯草芽孢桿 2,3,4-三氟-6-(易)羧化不全骨鈣Elisa
脫葉鏈霉 N-乙烯基咔唑促腎上腺皮質(zhì)釋放Elisa
卷枝毛霉 2,5-二甲氧基苯磺酰表皮生長因子受體Elisa
埃里希正青霉 2,5-二甲氧基苯硫酚包蟲病抗體Elisa
燼灰吸水鏈霉 3-胍基-L-氨酸鹽酸鹽視黃酸Elisa