以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
Motesanib是一種有效的VEGFR1/2/3的ATP競爭性抑制劑,IC50值為2nM/3nM/6nM,與對Kit的選擇性相似,是PDGFR和Ret的10倍多。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:453562-69-1 別名:AMG 706; 純度:99.93% 分子量:373.45 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時,加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
毛柄金錢菌(金針菇)血管內(nèi)皮粘附分子抗體Anti-MAPK6 Antibody溶質(zhì)載體家族30成員8(SLC30A8)
蛾微桿菌血管內(nèi)皮生長因子抗體Anti-MAPK6 Antibody(PB0706)溶質(zhì)載體家族26成員4(SLC26A4)
假土曲霉血管內(nèi)皮生長因子受體1抗體Anti-MAPK3 Antibody溶質(zhì)載體家族1成員5(SLC1A5)
里亞氏須腹菌血管內(nèi)皮生長因子受體2抗體Anti-MAPK6 Antibody溶質(zhì)載體家族16成員3(SLC16A3)
美澳型核果褐腐病菌血管內(nèi)皮生長因子受體3抗體Anti-MAPK8 Antibody溶質(zhì)載體家族16成員1(SLC16A1)
釀酒酵母波形蛋白抗體Anti-MAPT Antibody溶血卵磷脂酰基轉(zhuǎn)移4(LPCAT4)
淡紫擬青霉血管活性腸肽抗體Anti-MAPK8 Antibody溶血卵磷脂?;D(zhuǎn)移3(LPCAT3)
球形芽孢桿菌內(nèi)脂/內(nèi)臟脂肪/前B克增強(qiáng)因子1抗體Anti-MAS1 Antibody溶血卵磷脂?;D(zhuǎn)移2(LPCAT2)
哈茨木霉內(nèi)脂/內(nèi)臟脂肪/前B克增強(qiáng)因子1抗體Anti-MAPK9 Antibody溶血卵磷脂?;D(zhuǎn)移1(LPCAT1)
鐮刀菌屬玻璃粘連蛋白抗體Anti-MASP2 Antibody溶血磷脂酰乙?;D(zhuǎn)移1(LPEAT1)
枯草芽孢桿菌血管內(nèi)皮生長因子A抗體Anti-MAVS Antibody溶血磷脂酰肌?;D(zhuǎn)移(LPIAT)
蠟狀芽孢桿菌血管內(nèi)皮生長因子B抗體Anti-MATN3 Antibody溶血磷脂酰甘油?;D(zhuǎn)移1(LPGAT1)
露濕擬漆斑菌VAMP1囊泡相關(guān)膜蛋白1抗體Anti-MB Antibody溶血磷脂受體3(LPAR3)
黃多孔菌囊泡相關(guān)膜蛋白2抗體Anti-MAX Antibody溶血磷脂受體1(LPAR1)
龜裂鏈霉菌龜裂亞種基丁轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白VGAT抗體Anti-MB Antibody溶血磷脂Ⅲ(LYPLA3)
少根根霉戴爾變種氫離子轉(zhuǎn)運(yùn)ATP合成A1抗體Anti-MBD1 Antibody溶血磷脂Ⅱ(LYPLA2)
硫軟骨多糖核心蛋白抗體腸乳桿菌大鼠小腦顆粒細(xì)胞
線粒體載體腺嘌呤核苷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白6抗體沼澤考克氏菌大鼠神經(jīng)元細(xì)胞
Bcl2結(jié)合抗凋亡蛋白4抗體都柏林沙門氏菌大鼠嗅鞘細(xì)胞
分泌型白細(xì)胞蛋白抑制因子抗體腸沙門氏菌腸亞種雞血清型大鼠神經(jīng)星形膠質(zhì)細(xì)胞
VEGFR1/VEGFR2/VEGFR3抑制劑(Motesanib)珊瑚色諾卡氏 鹽酸沙拉沙星葡萄糖-6-磷酸Elisa
金黑小單孢 瑞替加濱葡萄糖-6-磷酸脫氫Elisa
宋氏志賀氏 諾氟沙星葡萄糖激Elisa
蘆葦黃桿 硝苯吡啶葡萄糖脫氫Elisa
草木樨中華根瘤 安息香葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4Elisa
月季黑斑病* G羥甲基戊二酸單酰Elisa
惡臭假單胞 間三聯(lián)苯羥脯氨酸Elisa
產(chǎn)氨短桿 茚去甲腎上腺Elisa
Rhizobium cellulosilyticum 異丁香酚(正+反)熱休克蛋白-70Elisa
球托霉屬w5株 百清熱休克蛋白90Elisa
庫德里阿茲威氏畢赤酵母 環(huán)辛烯絨毛膜促性腺Elisa
枯草芽孢桿 二十二烷溶Elisa
釀酒酵母 代苯肉堿脂酰轉(zhuǎn)移Elisa
木霉(加詞待譯) 2,6-二乙基苯(DEA)肉堿脂酰轉(zhuǎn)移1Elisa
運(yùn)動節(jié)桿 二十三烷狀腺原氨酸Elisa