以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
Btk抑制劑(PCI 29732) | PCI 29732 | 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg | 1~3天 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
PCI29732是不可逆的Btk抑制劑,IC50為8.2nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):330786-25-9 分子量:371.44 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長(zhǎng)或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
黑曲霉變種磷化CREB-1抗體Human TA-IgG(Trophoblast antigen-Immunoglobulin G) ELISA Kit人乙型肝炎病e抗原(HBeAg)免疫試劑盒
葡枝根霉磷化粒-巨噬集落激因子受體β抗體Human ZP-IgG(zona pellucida-Immunoglobulin G) ELISA Kit人乙型肝炎病e抗體(HBeAb)免疫試劑盒
玫瑰綠色鏈霉菌磷化N-鈣粘附分子抗體Human TA-IgG(Trophoblast antigen-Immunoglobulin G) ELISA Kit人乙型肝炎表面抗原(HBsAg)免疫試劑盒
根瘤菌磷化后期促進(jìn)復(fù)合蛋白3抗體Human CP-IgM(chlamydia pneumoniae-Immunoglobulin M) ELISA Kit人乙酰肝(HPA)免疫試劑盒
熒光假單胞磷化非受體酪激c-Abl抗體Human A16-IgG(Coxsackie virus A16-Immunoglobulin G) ELISA Kit人乙酰羧化合成(ACC)免疫試劑盒
金黃色葡萄球菌磷化非受體酪激c-Abl抗體Human MV-IgG(Measles virus-Immunoglobulin G) ELISA Kit人乙酰膽堿酯(AChE)抗體(IgG)免疫試劑盒
紅酵母屬9號(hào)染色體開放閱讀框75抗體Human MV-IgM(Measles virus-Immunoglobulin M) ELISA Kit人乙酰膽堿酯(AChE)免疫試劑盒
雙歧雙歧桿菌CD4抗體Human CVB-IgM(Coxsackievirus B-Immunoglobulin M) ELISA Kit人乙酰膽堿受體抗體(AChRab)免疫試劑盒
土曲霉血小板糖蛋白GPIb抗體Human CVB-IgG(Coxsackievirus B-Immunoglobulin G) ELISA Kit人乙酰膽堿(ACH)免疫試劑盒
膜醭畢赤酵母蛋白精N甲基4抗體Human ECHO-IgG(Enteric CytopathicHuman Orphan virus-Immunoglobulin G) ELISA Kit人乙脫氫18家族成員A1(ALDH18A1)免疫試劑盒
球毛殼菌磷化蛋白精N甲基4抗體Human ECHO-IgM(Enteric CytopathicHuman Orphan virus-Immunoglobulin M) ELISA Kit人乙脫氫(ALDH)免疫試劑盒
Bacillus tequilensis磷化周期依賴性激6抗體Human HDV-IgM(Hepatitis D Virus-Immunoglobulin M) ELISA Kit人乙基二免疫試劑盒
大腸桿菌磷化原癌基因CBL2抗體Human TOX-IgM(Toxoplasma-Immunoglobulin M) ELISA Kit人乙肝表面抗原大蛋白(HBV-LP)免疫試劑盒
多色節(jié)桿菌分裂周期蛋白7抗體Human TOX-IgG(Toxoplasma-Immunoglobulin G) ELISA Kit人乙脫氫(ADH)免疫試劑盒
皮氏羅爾斯通氏菌磷化分裂周期蛋白25抗體Human EV71-IgG(Enterovirus 71-Immunoglobulin G) ELISA Kit人乙呋(AD)免疫試劑盒
產(chǎn)氣莢膜梭菌 D型分裂周期蛋白25B抗體Human AS-IgG(anti sperm-Immunoglobulin G) ELISA Kit人胰脂肪(PL)免疫試劑盒
比目魚金黃桿菌Chryseobacterium│scophthalmum 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRHLAⅡ類組織相容性抗原,DPα1鏈試劑盒基異茜草-1-
栓孔菌Trametes│sp. 質(zhì)量規(guī)格:工業(yè)級(jí)HIV-1 TAT互動(dòng)蛋白2試劑盒肌
優(yōu)雅食烷菌Alcanivorax│venustensis 質(zhì)量規(guī)格:>95%,Pract GradeHIV試劑盒伐侖克林
Btk抑制劑(PCI 29732)(3S-反式)-5-[[4-(4-基)-3-基...英文名稱: Carbon Nanotube Multi-walled 20-40nm(diam.), 1-2µm(length)P21蛋白激活的蛋白激6抗體包裝100g
(6S)-四氫-L-二硫生物蝶呤英文名稱: Carbon Nanotube Multi-walled 40-60nm(diam.), 5-15µm(length)磷化P21蛋白激活的蛋白激6包裝25g
(6S)-四氫-L-硫生物蝶呤英文名稱: Carbon Nanotube Multi-walled 40-60nm(diam.), 1-2µm(length)酪磷α抗體包裝5g
(E)-4-羥基-N-去基它莫西芬英文名稱: Carbon Nanotube Multi-walled 60-100nm(diam.), 5-15µm(length)非受體型蛋白酪磷7抗體包裝100g
(E/Z)-4,4'-二羥基-N-去基它莫西芬英文名稱: 3,5-Dibenzyloxybenzyl Bromide磷化非受體型蛋白酪磷7抗體包裝1g
(E/Z)-N,N-二去基-4-羥基它莫西芬英文名稱: 3,5-Bis[3,5-bis(benzyloxy)benzyloxy]benzyl Bromide磷化非受體型蛋白酪磷7抗體包裝25g
(R)-(+)-4'-芐氧基卡維地洛英文名稱: 3,5-Bis(3,5-dimethoxybenzyloxy)benzyl Alcohol磷化蛋白激C亞性D型抗體包裝5g
(R)-(+)-4'-羥基卡維地洛英文名稱: 3,5-Bis(3,5-dimethoxybenzyloxy)benzyl Bromide蛋白激C mu型抗體包裝100ml
(R)-(+)-5'-芐氧基卡維地洛英文名稱: 3,5-Bis[3,5-bis(3,5-dimethoxybenzyloxy)benzyloxy]benzyl Bromide纖溶原激活物抑制因子抗體包裝500ml
(R)-(+)-O-去卡維地洛英文名稱: 3',5'-Diacetoxyacetophenone胃蛋白原C抗體包裝100mg
(R)-(+)-阿替洛爾英文名稱: 3',5'-Dihydroxyacetophenone磷化蛋白激C mu型抗體包裝1g
(R)-(+)-魯米特英文名稱: 3',5'-Dibenzyloxyacetophenone前纖維蛋白1抗體包裝5g
(R)-(+)-非洛地平英文名稱: 3,5-Dimethoxybenzyl Alcohol增殖核抗原抗體包裝1g
(R)-(+)-馬來噻嗎洛爾英文名稱: 3,5-Dimethoxybenzyl Bromide磷化粘著斑激抗體包裝250mg
(R)-(+)-鹽心得安英文名稱: 3,5-Dibromo-1-trimethylsilylbenzene磷化粘著斑激抗體包裝25g