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上海谷研實(shí)業(yè)有限公司 |
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15026555973 |
| 參考價(jià) | 面議 |
更新時(shí)間：2022-04-21 12:07:53瀏覽次數(shù)：268
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 20T |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | GOY-01X9624 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工 |
| 主要用途 | 公司產(chǎn)品僅供科研 | 英文名稱 | TUNEL Apoptosis Detection Kit (FITC) |
產(chǎn)品屬性：
中文名稱：TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(FITC)
英文名稱：TUNEL Apoptosis Detection Kit (FITC)
產(chǎn)品規(guī)格：20T
發(fā)貨周期：1～3天
公司產(chǎn)品僅用于科研
商品介紹：
本試劑盒應(yīng)用范圍廣，可以用于檢測(cè)冷凍或石蠟切片中的細(xì)胞凋亡情況，也可以檢測(cè)培養(yǎng)的貼壁細(xì)胞或懸浮細(xì)胞的凋亡情況。 細(xì)胞在發(fā)生凋亡時(shí)，會(huì)激活一些DNA內(nèi)切酶，這些內(nèi)切酶會(huì)切斷核小體間的基因組DNA。細(xì)胞凋亡時(shí)抽提DNA進(jìn)行電泳檢測(cè)，可以發(fā)現(xiàn)180-200bp的DNA ladder。 TUNEL (TdT mediated dUTP Nick End Labeling)細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒（FITC）可以用來檢測(cè)組織細(xì)胞在凋亡晚期過程中細(xì)胞核DNA的斷裂情況。其原理是在末端脫氧核糖核苷酸轉(zhuǎn)移酶（Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT）的作用下，在基因組DNA斷裂時(shí)暴露出的3′-羥基（3′-OH）末端摻入FITC-12-dUTP，從而可以用熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀檢測(cè)。 本試劑盒對(duì)標(biāo)記反應(yīng)進(jìn)行了優(yōu)化，采用佳比例的FITC-12-dUTP和未標(biāo)記dNTP進(jìn)行3’-OH末端的核苷酸摻入，使得同一個(gè)斷裂的DNA片段末端可以形成更長(zhǎng)的“標(biāo)記尾巴"。該“標(biāo)記尾巴"減少了相鄰摻入dNTP上標(biāo)記基團(tuán)的空間位阻，增加每個(gè)斷裂片段上的熒光基團(tuán)數(shù)目，降低熒光基團(tuán)相鄰后可能造成的聚集和淬滅，從而提高檢測(cè)靈敏度，減少非特異性反應(yīng)。 試劑盒組份： 5×Equilibration Buffer————750μl FITC-12-dUTP Labeling Mix———100 μl Recombinant TdT Enzyme—————20 μl Proteinase K (2 mg/ml)————40 μl DNase I (1 U/μl)———————5μl 10×DNase I Buffer——————100 μl 儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期一年。 |
細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面：
細(xì)胞生物學(xué)的研究?jī)?nèi)容十分廣泛,主要包括：
①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究；
②生物膜與細(xì)胞器的研究；
③細(xì)胞骨架體系的研究；
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控；
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控；
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡)；
⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化；
⑧細(xì)胞工程.
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
生長(zhǎng)分化因子11(GDF11)英文名稱：GDF11 ELISA Kit胞苷尿苷鳥苷結(jié)合蛋白1抗體包裝1g
生長(zhǎng)分化因子1(GDF1)英文名稱：GDF1 ELISA Kit原腸胚雙向形成相關(guān)蛋白抗體包裝5g
滲透性糖蛋白(Pgp)英文名稱：Pgp ELISA Kit分裂周期蛋白CDC123抗體包裝100g
腎足蛋白(NPHN)英文名稱：NPHN ELISA Kit神經(jīng)蠟樣質(zhì)脂褐質(zhì)沉積病蛋白CLN3抗體包裝25g
腎臟腦蛋白(KIBRA)英文名稱：KIBRA ELISA Kit趨化樣因子超家族成員3抗體包裝100ml
腎損傷分子1(Kim1)英文名稱：Kim1 ELISA Kit染色質(zhì)修飾蛋白1B抗體包裝25ml
腎(REN)英文名稱：REN ELISA Kit冷誘導(dǎo)RNA結(jié)合蛋白抗體包裝5ml
腎上腺能受體β3(ADRβ3)英文名稱：ADRβ3 ELISA Kit連接相關(guān)蛋白1抗體包裝25g
腎上腺能受體β2(ADRβ2)英文名稱：ADRβ2 ELISA Kit連接相關(guān)蛋白2抗體包裝5g
腎上腺能受體β1(ADRβ1)英文名稱：ADRβ1 ELISA Kit磷化周期依賴性激5抗體包裝250mg
腎上腺能受體α1A(ADRα1A)英文名稱：ADRα1A ELISA Kit異戊烯半胱羧基轉(zhuǎn)移抗體包裝1g
神經(jīng)源3(NEUROG3)英文名稱：NEUROG3 ELISA Kit鳥嘌呤核苷交換因子CLLD7抗體包裝5g
神經(jīng)元正五聚蛋白Ⅰ(NPTX1)英文名稱：NPTX1 ELISA Kit趨化樣因子超家族成員4抗體包裝25g
神經(jīng)元特異性烯化(NSE)英文名稱：NSE ELISA Kit趨化樣因子超家族成員7抗體包裝5g
神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子4(NT4)英文名稱：NT4 ELISA Kit趨化樣因子超家族成員5抗體包裝5g
蛹假交替單胞菌Pseudoalteromonas│undina 質(zhì)量規(guī)格：純度98%轉(zhuǎn)錄因子E2F1 紫莖女貞苷B;Ligupurpurosi
玫瑰色庫克菌Kocuria│roseus 質(zhì)量規(guī)格：純度大于98%,USPgrade轉(zhuǎn)錄因子AP-1 紫莖女貞苷A ;Ligupurpuros
小單孢菌屬Micromonospora│sp. 質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定,HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β誘導(dǎo)蛋白IG-H3試劑盒左旋肉堿; L(-)-Carnitine
TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(FITC)梭 5-甲基喹喔林信號(hào)3AElisa
腦膜膿性金黃桿 偏酸鎂信號(hào)4AElisa
異常漢遜酵母異常變種 甘氨酸鋁性別決定區(qū)Y框蛋白2Elisa
鏈格孢 蘋果?；?/span> 5-甲基-2-噻吩甲性結(jié)合球蛋白Elisa
釀酒酵母 四羥基二烷胸苷酸合成Elisa
橙色標(biāo)樁 磷酸三(1,3-二氯異基)酯胸腺活化調(diào)節(jié)趨化因子Elisa
平菇 L-3-苯基乳酸甲酯胸腺嘧啶核苷磷酸化Elisa
大腸埃希氏 2-甲巰基苯并噁唑胸腺β4Elisa
雙孢蘑菇 3-溴-4-氯苯酚胸腺β4樣蛋白3Elisa
紙葡萄穗霉 2-溴-5-氯苯酚胸腺肽α1Elisa
乳酸乳球乳亞種 3,5-二氯吡啶-4-甲雄烯二酮Elisa
芽孢桿屬 1,1-環(huán)基亞磺酸酯嗅質(zhì)蛋白4Elisa
雙通道計(jì)時(shí)定時(shí)器 2-乙基己酸鋅, Zn, contains 1% diethylene glycol monomet溴脫氧核苷尿嘧啶Elisa
Pseudomonas taiwanensis 1,5-二甲基-2-硝基亞氨基六氫-1,3,5-三血管活性腸肽Elisa
友好戈登氏 二乙基已酸鈣血管緊張1-7Elisa
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
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