商品介紹:
RO4929097是一種γ secretase抑制劑,IC50值為4nM,能夠抑制細(xì)胞內(nèi)Aβ40的產(chǎn)生和Notch活性,EC50值分別為14nM和5nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):847925-91-1 純度:98.02% 分子式:C??H??F?N?O? 分子量:469.4 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
小葉相思根瘤菌磷化絲裂原活化蛋白激MKK3/6抗體Human MINK1 ELISA Kit免疫球蛋白樣轉(zhuǎn)錄體受體(ILTsR/LIR/CD85)ELISA Kit
束型青霉磷化絲裂原活化蛋白激MKK6抗體Human MIPEP ELISA Kit免疫球蛋白輕鏈lambda(λ-IgLC)ELISA Kit
天津李時(shí)珍氏菌嗜粒趨化蛋白22抗體Human MIPOL1 ELISA Kit免疫球蛋白輕鏈kappa(κ-IgLC)ELISA Kit
金格桿菌甲硫腦啡肽抗體Human MKL1(MKL/myocardin-like protein 1) ELISA Kit免疫球蛋白結(jié)合蛋白(BIP)ELISA Kit
橄欖色硬膜鏈霉菌抗體Human MITD1 ELISA Kit免疫球蛋白γ-1鏈C區(qū)(IGHGI)ELISA Kit
粉樹(shù)孢基質(zhì)金屬蛋白9抗體Human Mitofilin ELISA Kit免疫球蛋白M(IgM)ELISA Kit
Sphingomonas panni 原癌基因M-ras抗體Human F12(Coagulation factor XII) ELISA Kit免疫球蛋白j鏈(Ig-j)ELISA Kit
魯氏接合酵母單核趨化蛋白1抗體Human MKNK2 ELISA Kit免疫球蛋白G4(IgG4)ELISA Kit
雙孢蘑菇(白蘑菇、洋蘑菇)抗體Human MFN1 ELISA Kit免疫球蛋白G3(IgG3)ELISA Kit
漢遜德巴利酵母雞支原體抗體Human METT10D ELISA Kit免疫球蛋白G1(IgG1)ELISA Kit
蘇云金芽胞桿菌熊本亞種線粒體轉(zhuǎn)錄因子1抗體Human MED4 ELISA Kit免疫球蛋白G(IgG)ELISA Kit
荔枝有絲分裂抑制缺陷蛋白1抗體Human MED6 ELISA Kit免疫球蛋白G Fc片段(Fcγ)ELISA Kit
東方伊薩酵母膜相關(guān)環(huán)指蛋白10抗體Human MEF2A ELISA Kit免疫球蛋白G Fc段受體Ⅲ(FcγRⅢ/CD16)ELISA Kit
色串孢屬粘膜相關(guān)淋巴組織淋巴瘤轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1抗體Human MED8 ELISA Kit免疫球蛋白G Fc段受體Ⅱ(FcγRⅡ/CD32)ELISA Kit
棲果盤孢粘膜血管定居因子抗體Human MEIS3 ELISA Kit免疫球蛋白G Fc段受體Ⅰ(FcγRⅠ/CD64)ELISA Kit
停滯棒桿菌抑癌基因抗體Human MUC5B(Mucin-5B) ELISA Kit免疫球蛋白E(IgE)ELISA Kit
粗皮側(cè)耳(平菇)Pleurotus│ostreatus (Jacq.) P. Kumm. 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR鹽小檗堿
基桿菌Phenylobacterium│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98%,標(biāo)準(zhǔn)品鹽青藤堿
幽門螺桿菌Helicobacter│pylori 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR巖白菜
γ secretase抑制劑(RO4929097)EphB2 R EphB2 R抗體異戊 分子生物學(xué)級(jí),>99%(GC)
EPOR 紅生成受體抗體異戊 GCS,≥99.8% (GC)
EphB6 酪氨蛋白激受體B6抗體癸酯 ≥99%
ER-alpha 雌激受體α抗體椰子 98%
ERAB 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)Aβ相關(guān)結(jié)合蛋白抗體壬 CP,95%
ERCC1 DNA切除修復(fù)蛋白1抗體壬 97%
ERK2/MAPK1 絲裂原活化蛋白激1抗體壬 >99.5% (GC)
phospho-MEK1/MAPKK1(Ser298) 化絲裂原活化蛋白激激1抗體壬色標(biāo)Standard for GC ,>99% (GC)