商品介紹:
Alvespimycin hydrochloride是一種有效的Hsp90抑制劑,結(jié)合到Hsp90,EC50為62±29nM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:467214-21-7 別名:17-DMAG;KOS-1022;NSC 707545 純度:99.32% 分子量:653.21 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
以下是細胞生物學(xué)試劑的詳細介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
Hsp90抑制劑 | Alvespimycin hydrochloride | 1mL(10mM)|10mg|25mg|100mg|200mg|500mg | 1~3天 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養(yǎng)液,將細胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標,PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
孢小克銀漢霉泛蛋白連接D1抗體Anti-LOXL1 Antibody神經(jīng)調(diào)節(jié)3(NRG3)
褐球固氮菌泛蛋白連接C抗體Anti-LPA(Apo A) Antibody神經(jīng)調(diào)節(jié)2(NRG2)
油菜菌核病菌泛蛋白連接E2I抗體Anti-LPAR6 Antibody神經(jīng)調(diào)節(jié)1(NRG1)
皮狀假絲酵母泛蛋白連接D2抗體Anti-LPXN Antibody神經(jīng)肽Y受體Y5(NPY5R)
糞腸球菌泛蛋白連接G2抗體Anti-LPP Antibody神經(jīng)肽Y受體Y2(NPY2R)
白地霉泛蛋白連接L3抗體Anti-LPP Antibody神經(jīng)肽Y受體Y1(NPY1R)
路德類酵母泛蛋白連接2N抗體Anti-LPP Antibody神經(jīng)肽Y(NPY)
雞傷寒沙門氏菌葡萄糖神經(jīng)酰合成抗體Anti-LRIG1 Antibody神經(jīng)肽W(NPW)
耐鹽枝孢菌泛結(jié)合E2樣蛋白抗體Anti-LRIG3 Antibody神經(jīng)肽VF(NPVF)
枯草芽孢桿菌枯草亞種尿嘧啶核苷磷化1抗體Anti-LRP5 Antibody神經(jīng)肽S受體(NPSR)
纖維纖維單胞菌肌營養(yǎng)不良蛋白相關(guān)蛋白1抗體Anti-LRP1 Antibody神經(jīng)肽S(NPS)
AuranobacterUL16結(jié)合蛋白1蛋白抗體Anti-LRP6 Antibody神經(jīng)肽FF(NPFF)
喬木鏈格孢UL16結(jié)合蛋白2抗體Anti-LRPPRC Antibody神經(jīng)肽B(NPB)
白黃鏈霉菌尿苷酰二磷葡萄糖焦磷化2抗體Anti-LRRC32 Antibody神經(jīng)損傷誘導(dǎo)蛋白2(NINJ2)
Rhizobiales質(zhì)子梯度調(diào)節(jié)蛋白1抗體Anti-LRRK2 Antibody神經(jīng)損傷誘導(dǎo)蛋白1(NINJ1)
枯草芽胞桿菌枯草亞種泛結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體Anti-LSM2 Antibody神經(jīng)絲束蛋白(NPTN)
微管卷曲蛋白SYNC抗體弗勞地檸檬桿菌大鼠腎成纖維細胞
鈉通道亞基β4抗體普通擬桿菌大鼠尿道上皮細
基質(zhì)交感分子1抗體嗜熱棲熱菌大鼠輸尿管上皮細胞
血清淀粉樣蛋白4抗體高加索奶乳桿菌大鼠腎管狀上皮細胞
Hsp90抑制劑羊肚 蓖麻油Na-K-ATPElisa
黃綠口蘑 氧化釤P450膽固側(cè)鏈裂解Elisa
豌豆根瘤 氧化釹α干擾Elisa
茄圓屬 氧化鑭α酮戊二酸脫氫Elisa
巴斯德畢赤酵母 氧化釓γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽Elisa
香菇 氧化銪δ氨基乙酰酸脫水Elisa
畢赤酵母 氧化鉺白介1Elisa
南海芽孢桿 氧化鏑白介1βElisa
干酪乳桿 燒堿石棉白介6Elisa
釀酒酵母 燒堿石棉白介8Elisa
孟氏假單胞 乙酸鎳表皮生長因子Elisa
大腸埃希 堿式碳酸鎳氨酸氨基轉(zhuǎn)移Elisa
Bacillus subtilis subsp. subtilis 三氧化二鎳二Elisa
納西桿屬 硫酸鍶酮酸激Elisa
禾頂囊殼 碳酸鍶酮酸羧化Elisa