以下是細胞生物學試劑的詳細介紹:
商品介紹:
Nelarabine(Arranon,506U78)是嘌呤核苷酸類似物,為DNA合成抑制劑,對腫瘤細胞的IC50為0.067-2.15μM,可作用于T細胞急性淋巴細胞白血病。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:121032-29-9 別名:506U78;GW 506U78;Nelzarabine 純度:98.0% 分子量:297.27 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養(yǎng)液,將細胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標,PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
阪崎腸桿菌P73腫瘤抑制基因抗原Anti-DIRAS1 Antibody人睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子(CNTF)
苜蓿中華根瘤菌p70S6Kb抗原Anti-DLC1 Antibody人睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子(CNTF)
*擬蛹蟲草癌易感基因相關(guān)蛋白2Anti-DIO3 Antibody人CD30分子(CD30)
洋蔥伯克霍爾德菌血小板活化因子受體抗原Anti-DKC1 Antibody人CD30分子(CD30)
谷棒桿菌 磷化p21激活激4多肽抗原Anti-DLEC1 Antibody人CXC趨化因子受體1(CXCR1)
鐮刀菌激活激PAK7/PAK5抗原Anti-DLG2 Antibody人CXC趨化因子受體1(CXCR1)
海膽橙色小單孢菌蛋白激活受體-1抗原Anti-DLEU7 Antibody人XC趨化因子受體1(XCR1)
土壤短波單胞菌蛋白激活受體-2抗原Anti-DLGAP1 Antibody人XC趨化因子受體1(XCR1)
瓦尼針層孔菌蛋白活化受體4/前列腺凋亡反應蛋白4抗原Anti-DLGAP5 Antibody人二級淋巴組織趨化因子(SLC/CCL21)
大腸埃希氏菌多腺苷二磷多聚抗原(N端)Anti-DLGAP5 Antibody人二級淋巴組織趨化因子(SLC/CCL21)
南方菌寄生菌配對盒基因8抗原Anti-DLL4 Antibody人E鈣粘著蛋白/上皮性鈣黏附蛋白(E-Cad)
德干高原鏈霉菌配對盒基因9抗原Anti-DLX3 Antibody人E鈣粘著蛋白/上皮性鈣黏附蛋白(E-Cad)
鐮孢屬P-鈣粘附分子抗原Anti-DLK1 Antibody人腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)
Herbaspirillum肝腸鈣粘連蛋白抗原Anti-DMAC2L Antibody人腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)
阿魏側(cè)耳凋亡相關(guān)蛋白4抗原Anti-DLX4 Antibody人白活化黏附因子(ALCAM)
膠孢凋亡相關(guān)蛋白TFAR19抗原Anti-DMC1 Antibody人白活化黏附因子(ALCAM)
磷化蛋白激CT500抗體淡紫色擬青霉人胚腎上皮細胞
p21活化蛋白激ARHG7抗體光孢短柄帚霉人乳腺癌細胞(耐阿霉)
血小板源性生長因子受體β樣蛋白抗體香蕉炭疽盤長孢菌人食管癌細胞
抑癌蛋白DLP1抗體許旺酵母小鼠淋巴瘤細胞
DNA合成抑制劑(Nelarabine)瓊斯氏 Schleicheol 2
赤紅球 三裂尾草(供應商少)
多殺性巴氏桿 藜蘆
施氏假單胞 芝麻
Sphingomonas 對乙?;交酋?/span>
金色鏈霉 對氨基甲酯
大腸埃希 柳匍匐次苷
芽孢桿屬 Rutaretin
附球狀暗殼孢 葉含乙酰癭花香茶菜 B
黑森新鞘氨 連翹酸
產(chǎn)二鏈霉 槲皮3-O-洋槐糖苷
污泥枝動 Quercetin 3,4'-dimethyl ether
泡盛曲霉 O-beta-D-吡喃葡萄糖苷對乙烯基苯酯
臭靈丹酸
蟬花* Patoside B