以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
商品介紹:
NBD-557是HIV-1抑制劑。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):333352-59-3 純度:99.43% 分子量:382.3 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長(zhǎng)或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
英文名稱: 2-Phenylacetamide早期發(fā)育調(diào)控蛋白2抗體包裝100g
呋塞米(速尿)英文名稱: Enoxacin磷酯Cβ3包裝25g
咪唑英文名稱: [Nle4,DPhe7] a-MSH, amide; Melanotan I血小板源性生長(zhǎng)因子A抗體包裝100mg
芬那,滅英文名稱: [Nle8’18,Tyr34]-pTH (1-34) amide (bovine)特異性核苷果糖β抗體包裝500mg
喹英文名稱: [Nle8’18,Tyr34]-pTH (3-34) amide (bovine)11號(hào)染色體開放閱讀框73抗體包裝25mg
馬西尼/馬澤尼英文名稱: [Nle8’18,Tyr34]-pTH (7-34) amide (bovine)磷乙轉(zhuǎn)移A抗體包裝100ml
尼辛葡英文名稱: [Phe2,Orn8]-Oxytocin前列環(huán)受體抗體包裝1g
派利多,利多英文名稱: [Ser4,Ile8]-Oxytocin原鈣粘蛋白7抗體包裝5g
他英文名稱: [Tyr34]-pTH (7-34) amide (bovine)過氧化物膜蛋白1抗體包裝1mg
福美斯坦英文名稱: [Trp4]-Kemptide橋粒斑菲蛋白2抗體包裝100ml
福莫特羅英文名稱: [Tyr8] Bradykinin胞粘蛋白結(jié)合調(diào)節(jié)蛋白抗體包裝25ml
福沙吡坦二葡(MK-0517)英文名稱: [Tyr9]- β-MSH (porcine)絲/蘇蛋白激PCTK2抗體包裝100g
福辛普利鈉英文名稱: α-ANF(1-28), human磷二酯7抗體包裝25g
富馬福莫特羅 (二)英文名稱: α-MSH磷二酯7B抗體包裝5g
富馬福莫特羅(無)英文名稱: β-Amyloid Peptide (1-42), human先天性眼外肌纖維化相關(guān)蛋白FEOM2抗體包裝100mg
日本曲霉Aspergillus│japonicus 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>97%,BR黃體生成試劑盒表沒食子兒茶沒食子酯;(-)-Epi
釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品氧化試劑盒表兒茶沒食子酯;(-)-Epicat
亞金黃粘蓋牛肝菌Suillus│subaureus (Peck) Snell 質(zhì)量規(guī)格:>95%環(huán)磷腺苷試劑盒表沒食子兒茶;(-)-Epigallo
HIV-1抑制劑(NBD-557)轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子C/EBP β抗體硫新霉(標(biāo)準(zhǔn)品) Megestrol base
CREB結(jié)合蛋白抗體硫粘桿菌(標(biāo)準(zhǔn)品) Estradiene dione-3-keta
嗜粒趨化蛋白抗體硫辛(標(biāo)準(zhǔn)品) Sorafenib base
黑色瘤粘附分子CD146抗體硫唑嘌呤(標(biāo)準(zhǔn)品) Histamine phosphate
磷化周期E抗體硫唑嘌呤雜質(zhì)(標(biāo)準(zhǔn)品) Chloroquine diphosphate
α-s2酪蛋白抗體柳酚,利膽酚(標(biāo)準(zhǔn)品) (-)-Hyoscyamine
組織蛋白B抗體六氟異(標(biāo)準(zhǔn)品) (-)-Hyoscyamine
CXCL10趨化因子10/干擾誘導(dǎo)蛋白10抗體六蜜(標(biāo)準(zhǔn)品) Dextran D70
CXC趨化因子14抗體靈(標(biāo)準(zhǔn)品) Dextran D40