以下是細胞生物學試劑的詳細介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
突變體EGFR變構抑制劑 | EAI045 | 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg|500mg | 1~3天 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
EAI045是突變體EGFR變構抑制劑,在10μM ATP時抑制EGFR,EGFRL858R,EGFRT790M和EGFRL858R/T790M的IC50值分別為1.9,0.019,0.19和0.002μM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:1942114-09-1 純度:99.33% 分子量:383.4 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養(yǎng)液,將細胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設置經(jīng)凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設定十字門的位置。結果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標,PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
南游動球菌轉(zhuǎn)移生長因子β3抗體(TGFβ3)Anti-KIF20B Antibody嗜粒趨化因子(ECF)
大腸埃希氏菌轉(zhuǎn)移生長因子β受體2抗體(TGF-βRⅡ,TGFβRⅡ)Anti-KIF3A Antibody嗜乳脂蛋白亞家族1成員A1(BTN1A1)
香菇轉(zhuǎn)移生長因子β受體1抗體Anti-KIN Antibody嗜鉻蛋白B(CHGB)
克魯斯假絲酵母甲狀腺過氧化物抗體Anti-KIF2C Antibody(PB0228)嗜鉻蛋白A(CHGA)
彎曲假單胞菌腫瘤壞死因子受體1相關死亡域蛋白抗體Anti-KIN Antibody視紫質(zhì)(RHO)
釀酒酵母生精凋亡相關基因3抗體Anti-KISS1R Antibody視錐蛋白樣蛋白1(VSNL1)
弓形蟲(QHO株)狀腺T3抗體Anti-KISS1R Antibody視網(wǎng)膜劈裂蛋白(RS)
丁梭菌按蚊硫酯包含蛋白-1抗體Anti-KIT Antibody視網(wǎng)膜母瘤蛋白1(RB1)
發(fā)酵假絲酵母端粒結合蛋白P23抗體Anti-KITLG Antibody視網(wǎng)膜鈣黏附蛋白(RCAD)
釀酒酵母生精凋亡相關基因6抗體Anti-KIT Antibody(PB0240)視神經(jīng)蛋白3(OPA3)
葉生布勒擔子酵母酪激C抗體(神經(jīng)生長因子受體的一種)Anti-KITLG Antibody視變誘導反應蛋白(OPTN)
大腸埃希氏桿菌原肌球蛋白抗體Anti-KITLG Antibody視黃脫氫8(RDH8)
圓錐曲霉促甲狀腺受體抗體Anti-KLF3 Antibody視黃脫氫5(RDH5)
單胞菌屬促甲狀腺受體抗體(C端)Anti-KLF4 Antibody視黃脫氫15(RDH15)
產(chǎn)氣莢膜梭菌 C型磷化轉(zhuǎn)化生長因子β活化激1Anti-KLF4 Antibody視黃脫氫14(RDH14)
豬丹絲菌磷化NF-κB活化激抗體Anti-KLF4 Antibody視黃脫氫13(RDH13)
信號肽肽SPP抗體具核梭桿菌聚核亞種大鼠肺動脈成纖維細胞
溶質(zhì)載體鋅轉(zhuǎn)運3抗體巴氏芽孢桿菌大鼠氣管和支氣管上皮細胞
核轉(zhuǎn)錄因子SOX22抗體艱難梭菌大鼠肺大靜脈內(nèi)皮細胞
核轉(zhuǎn)錄因子SOX4抗體出血性大腸埃希氏菌 O157:H7大鼠支氣管成纖維細胞
突變體EGFR變構抑制劑球孢白僵 二十二肝腸孢蟲Elisa
米曲霉 加雷沙星白斑病Elisa
水原拉梅爾芽胞桿 氨基二茂鐵谷氨酰轉(zhuǎn)Elisa
發(fā)酵接合酵母 黃豆粉黃頭病Elisa
皺蓋疣柄牛肝 卡松甲殼動物高血糖Elisa
細黃鏈霉 馬來酸苯那敏法尼酸甲基轉(zhuǎn)移Elisa
果生鏈核盤 3-羧基苯甲多巴脫羧Elisa
黃海芽孢桿 荷葉堿微囊藻-LRElisa
海沙類諾卡氏* N-琥珀酰亞碳酸叔丁酯環(huán)磷酸鳥苷Elisa
尖孢鐮胞 3,4,5-氧基苯甲環(huán)磷酸腺苷Elisa
HIV假病 176-1 檸檬烯酚氧化Elisa
乳桿屬 2-萘酚-3 ,7-二磺酸二鈉精氨酸激Elisa
節(jié)桿 米諾地爾中過敏原原肌球蛋白Elisa
靈芝 橡膠硫化促進劑CBS(CZ)肌苷酸Elisa
海南假絲酵母 卡波姆934鳥苷酸Elisa