產(chǎn)品屬性:
中文名稱:Rho抑制劑(Rhosin鹽酸鹽)
英文名稱:Rhosin hydrochloride
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg
發(fā)貨周期:1~3天
公司產(chǎn)品僅用于科研
商品介紹:
Rhosin鹽酸鹽是Rho特異性抑制劑,結(jié)合WT RhoA的Kd值為0.4uM,對Cdc42和Rac1作用無。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:1281870-42-5 純度:99.98% 分子量:394.86 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個方面:
細(xì)胞生物學(xué)的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括:
①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究;
②生物膜與細(xì)胞器的研究;
③細(xì)胞骨架體系的研究;
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控;
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控;
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡);
⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化;
⑧細(xì)胞工程.
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
構(gòu)巢曲霉Alexa Fluor 488標(biāo)記的羊抗人IgMAnti-SRCIN1 Antibody高爾基蛋白73(GP73)
草木樨中華根瘤菌Alexa Fluor 555標(biāo)記的羊抗人IgMAnti-SRI Antibody干因子(SCF)
雅致小克銀漢霉Alexa Fluor 647標(biāo)記的羊抗人IgMAnti-SRI Antibody干擾誘導(dǎo)T-α亞族趨化劑(ITαC)
分枝卷霉PE-Cy5.5標(biāo)記的羊抗人IgMAnti-SRP1/KPNA1 Antibody干擾調(diào)節(jié)因子9(IRF9)
大腸埃希氏桿菌PE-Cy7標(biāo)記的羊抗人IgMAnti-SRSF3 Antibody干擾調(diào)節(jié)因子5(IRF5)
釀酒酵母Cy3標(biāo)記的羊抗人IgMAnti-SSR3 Antibody干擾調(diào)節(jié)因子4(IRF4)
灰樹花堿性磷(AP)標(biāo)記的羊抗人IgMAnti-SRY Antibody干擾調(diào)節(jié)因子1(IRF1)
東方伊薩酵母辣根過氧化物標(biāo)記的羊抗人IgMAnti-SSTR2 Antibody干擾ω(IFNω)
短柄帚霉辣根過氧化物標(biāo)記的小鼠抗人IgGAnti-SRSF1 Antibody(PB0431)干擾κ(IFNκ)
薄蓋靈芝堿性磷(AP)標(biāo)記的小鼠抗人IgGAnti-SSTR3 Antibody干擾ε(IFNε)
米曲霉羅丹明標(biāo)記的小鼠抗人IgGAnti-SSX2 Antibody干擾γ誘導(dǎo)蛋白30(IFI30)
殼梭孢屬(都不提供)FITC標(biāo)記的小鼠抗人IgGAnti-SSTR1 Antibody干擾γ誘導(dǎo)蛋白16(IFI16)
枯草芽孢桿菌膠體金標(biāo)記的小鼠抗人IgGAnti-ST13 Antibody干擾γ誘導(dǎo)單核因子(MIγ)
鉛黃腸球菌PE-Cy5.5標(biāo)記的小鼠抗人IgGAnti-ST13 Antibody干擾γ(IFNγ)
粉紫小菇PE-Cy7標(biāo)記的小鼠抗人IgGAnti-ST7 Antibody干擾β(IFNβ)
假絲酵母屬Alexa Fluor 350標(biāo)記的小鼠抗人IgGAnti-STAR Antibody干擾α8(IFNα8)
谷受體調(diào)節(jié)蛋白2抗體檸檬明串珠菌大鼠成年表皮角質(zhì)形成層細(xì)胞提取物
鈉鈣交換蛋白3抗體蒼白桿菌屬大鼠內(nèi)臟脂肪細(xì)胞提取物
NDUFAF4抗體鞘桿菌屬宮頸上皮細(xì)胞和腫瘤原代細(xì)胞提取物
巰基氧化1抗體羅輪隱球酵母直腸上皮細(xì)胞和腫瘤原代細(xì)胞提取物
Rho抑制劑(Rhosin鹽酸鹽)釀酒酵母 AmberliteIRA-411陰離子交換樹脂
黑曲霉 維生A酸
釀酒酵母 DL-α-酚醋酸酯
白囊耙齒 維生K4
凍干粉 金黃色葡萄球(定量) 5(6)-羧基熒光二乙酸酯
葡萄穗霉 堿性紅1:1
秦氏蜜環(huán) 活性大紅
雞腿菇 活性艷紅
薄邊蜂窩 酸性艷紅
半軟干酪居真細(xì) 5(6)-羧基熒光
節(jié)桿 酸性橙12
桃色枝頂孢 羥基萘酚藍(lán)二鈉
鍺栓孔 桑根酮K
美味側(cè)耳(紫孢側(cè)耳) 刻葉紫堇
斑玉蕈 24-去乙酰澤瀉O
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞,細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)