以下是細胞生物學(xué)試劑的詳細介紹:
商品介紹:
PD150606是一個選擇性的,能穿過細胞的非肽calpain抑制劑。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:179528-45-1 純度:98.0% 分子量:306.12 儲存條件:-20℃避光,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養(yǎng)液,將細胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標,PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
唐德鏈霉菌小鼠磷脂酰絲Anti-MRGPRE Antibody人胰島(INS)
孟氏假單胞菌兔p53Anti-MRGPRF Antibody人胰島(INS)
釀酒酵母大鼠磷化核因子κB抑制蛋白αAnti-MRC2 Antibody人C肽(C-Peptide)
楔孢犁頭霉人Toll樣受體9Anti-MRGPRE Antibody人C肽(C-Peptide)
大腸埃希氏菌兔Bcl-2相關(guān)X蛋白Anti-MRGPRF Antibody人絨毛膜促性腺激(HCG)
枯草芽孢桿菌枯草亞種植物磷脂酰甘油Anti-MRGPRX1 Antibody人絨毛膜促性腺激(HCG)
魯氏接合酵母小鼠磷甘油酯Anti-MRGPRX4 Antibody人絨毛膜促性腺激β(β-CG)
釀酒酵母人轉(zhuǎn)化生長因子β2Anti-MRGPRG Antibody人絨毛膜促性腺激β(β-CG)
釀酒酵母大鼠核因子κBAnti-MRGPRG Antibody人促黃體激(LH)
河北木霉人單核趨化蛋白4Anti-MRPL10 Antibody人促黃體激(LH)
四繞曲霉大鼠樹突狀表面特異性C型凝集-間黏附分子3結(jié)合整合分子Anti-MRGPRX4 Antibody人潑尼松龍(PS)
釀酒酵母兔阿霉Anti-MRPL11 Antibody人潑尼松龍(PS)
植物乳桿菌小鼠Ⅰ型膠原交聯(lián)羧基末端肽Anti-MRPL12 Antibody人瘦(LEP)
損蘑菇紫色桿菌植物玉米索核苷Anti-MRPL12 Antibody人瘦(LEP)
斜臥青霉植物赤霉Anti-MRPL13 Antibody人苗條受體(LR/Ob-R)
靈芝(紅芝, 赤芝)兔基質(zhì)金屬蛋白2/明膠AAnti-MRPL16 Antibody人苗條受體(LR/Ob-R)
G蛋白信號調(diào)節(jié)蛋白21抗體簇生離褶傘人胰腺導(dǎo)管癌細胞
受體相互作用蛋白激1抗體侵染鏈格孢大鼠腦膠質(zhì)瘤細胞
受體輔助蛋白1抗體竹針孢座囊菌人原位胰腺腺癌細胞
環(huán)指蛋白135抗體棒狀桿菌屬人肺鱗癌細胞
非肽calpain抑制劑(PD150606)新城疫病 1,7-Bis(4-hydroxyphenyl)hepta-4,
茄病鐮刀 1,6-二噁螺[4.5]-2-癸
牽牛鏈格孢 1,4,6-三羥基-5-甲氧基-7-異戊二烯基呫噸酮
德氏乳桿保加亞亞種 1,4,5,6-Tetrahydroxy-7,8-dipreny
綠毛殼擬毛梭孢變種 (Z)-Lachnophyllum lactone
貝形圓孢側(cè)耳 (2,4-Dihydroxyphenyl)acetonitril
天藍黃鏈霉 二乙酸-(+)-松脂酯
多根硬皮馬勃 (+)-Conocarpan
副豬嗜血桿 松脂-4-O-beta-D-吡喃葡萄糖苷
短密青霉 尼洛替星
棒彎孢 毛葉香茶菜丁
惡臭假單胞 2',6'-Dihydroxypinobanksin
枯草芽孢桿 15-Demethylplumieride
黃曲霉 葉下珠脂
石榴干腐病 商陸黃