以下是細胞生物學試劑的詳細介紹:
商品介紹:
用途: 凋亡細胞的形態(tài)學特征檢測 注意事項: Hoechst33258是一種熒光染料,可以穿透細胞膜的藍色熒光染料,對細胞的毒性較低。Propidium Iodide簡稱PI,又稱碘化丙啶,對人體有刺激性。 儲存條件:-20℃,避光,12個月 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養(yǎng)液,將細胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設置經(jīng)凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標,PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
牛蒡苷元(標準品)英文名稱: Picloram促性腺釋放激受體2抗體包裝25g
牛蒡子(牛蒡子)(標準品)英文名稱: PyrimethanilG蛋白偶聯(lián)受體106抗體包裝5g
牛蒡子苷(標準品)英文名稱: PhenmediphamG0/G1期開關調(diào)節(jié)蛋白2抗體包裝100g
牛蒡子苷元-4'-O-β-龍膽二糖苷(標準品)英文名稱: Metalaxyl solutionG蛋白偶聯(lián)受體GPR162蛋白抗體包裝25g
牛大力(美麗崖豆藤)(標準品)英文名稱: Nitrapyrin鋅指蛋白461抗體包裝1g
牛膽粉(標準品)英文名稱: ProfenofosG蛋白偶聯(lián)受體109A抗體包裝5g
牛耳楓(標準品)英文名稱: PyriproxifenG激錨定蛋白1抗體包裝1g
牛黃(標準品)英文名稱: Phenthoate solutionDNA修復蛋白GIYD2抗體包裝5g
牛磺鵝去氧膽(標準品)英文名稱: Propanil solution生長抑制和分化相關蛋白抗體包裝25g
牛膝(標準品)英文名稱: Phosalone生發(fā)中心相關核蛋白MCM3抗體包裝5g
牛至(標準品)英文名稱: Propargite solution葡萄糖-6磷脫氫抗體包裝25g
扭肚藤(標準品)英文名稱: Plifenat solution眼發(fā)育相關基因蛋白ODAG抗體包裝5g
女貞苷(標準品)英文名稱: Plifenat solution特異性囊腫病液體蛋白15包裝1g
女貞子(標準品)英文名稱: Propamocarb特異性囊腫病液體蛋白15包裝250mg
諾米林(標準品)英文名稱: Cloquintocet-mexyl生長激釋放因子受體抗體包裝5g
施氏假單胞菌Pseudomonas│stutzeri 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>99%,標準品泡狀過表達癌癥促生存蛋白1試劑盒木香烴內(nèi)酯;costunolide
金針菇雜19Flammulina│velutipes var. velutipes (Curtis) Singer 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,BR,可用于培養(yǎng),一合物排序連接蛋白3試劑盒毛蕊異黃;Calycosin
緊密枝頂孢Acremonium│strictum 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標準品偶聯(lián)因子6試劑盒毛蕊異黃苷;Calycosin-7-O
Hoechst33258/PI細胞凋亡染色試劑盒葡萄座腔 苯甲酰肟消退Elisa
球孢白僵 反-4-氨基環(huán)己甲酸甲酯鹽酸鹽CD31分子Elisa
副豬嗜血桿 1-丁基-2,3-二甲基咪唑氯鹽CD105分子Elisa
苔蘚隱球酵母 4-(氨基磺?;?苯酸碳酸酐6抗體Elisa
米曲霉疏展變種 7-硝基喹啉消退D1Elisa
冷桿屬 (S)-(+)-1-基茚滿,ChiPros,ee99+%富含脯氨酸的蛋白質(zhì)14Elisa
猴頭菇 3-氨基-2-羥基-5-溴吡啶線粒體融合2Elisa
忍冬黑痣 線粒體融合1Elisa
腐皮殼 (2S,3S)-1,2-環(huán)氧-3-(叔丁氧基羰基氨基)-4-苯丁烷Fission 1蛋白Elisa
酸桿屬 9,10-二氫蒽水痘帶狀皰疹病Elisa
墳墓節(jié)桿 2-異丁基-4-甲基噻唑流行性腮腺炎病Elisa
動物雙歧桿乳亞種 2-氨基蒽半胱氨酸豐富分泌蛋白3Elisa
核盤 苯肼-4-磺酸半水合物前列腺4Elisa
鴨疫里氏桿 乙酰乙酸對硝基芐酯骨髓基質(zhì)抗原1Elisa
假單胞屬 2-芐氧基-5-氯苯酸L-色酸Elisa