以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
MRT68921鹽酸鹽是有效的ULK1和ULK2抑制劑,抑制ULK1和ULK2,IC50分別為2.9nM和1.1nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 純度:99.71% 分子量:471.04 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時(shí)內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
厚白盤革菌鋅指蛋白828抗體Anti-NFATC1 Antibody尿激型纖溶原激活因子受體(uPAR)
黑腐皮殼菌胞質(zhì)緊密粘連蛋白1抗體(閉鎖小帶蛋白1)Anti-NFATC2 Antibody尿黑1,2-雙加氧(HGD)
球孢白僵菌凋亡相關(guān)蛋白激3抗體Anti-NFATC1 Antibody尿苷二磷糖基轉(zhuǎn)移8(UGT8)
皺褶青霉鋅指蛋白211抗體Anti-NFATC2 Antibody尿卟啉原脫羧(UROD)
枯草芽孢桿菌鋅指蛋白749抗體Anti-NFATC3 Antibody鳥嘌呤脫(GDA)
麥芽糖假絲酵母磷化zeta相關(guān)蛋白70抗體Anti-NFATC3 Antibody鳥苷激1(GUK1)
大耳霉Z DNA結(jié)合蛋白抗體Anti-NFATC4 Antibody鳥苷環(huán)化激活因子2B(GUCA2B)
弗雷德里克斯堡假單胞菌鋅結(jié)合乙脫氫結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體Anti-NFATC3 Antibody鳥苷環(huán)化激活因子2A(GUCA2A)
黑曲霉鋅指蛋白481抗體Anti-NFATC4 Antibody鳥轉(zhuǎn)(OAT)
巨型艾美耳球蟲鋅指蛋白ZBTB34抗體Anti-NFATC4 Antibody鳥脫羧抗1(OAZ1)
堆形艾美耳球蟲鋅指蛋白297B抗體Anti-NFE2L2 Antibody(PB0327)黏膜地址黏附分子(MAdCAM1)
芽孢桿菌屬鋅指蛋白340抗體Anti-NFE2L2 Antibody黏病耐藥蛋白2(MX2)
樟疫霉鋅指蛋白855抗體Anti-NFE2L1 Antibody黏病耐藥蛋白1(MX1)
蘇云金芽孢桿菌日本亞種鋅指蛋白ZBTB5抗體Anti-NFIA Antibody(PB1136)尼克酰腺嘌呤二核苷磷氧化5(NOX5)
桔林油脂酵母鋅指蛋白ZBTB6抗體Anti-NFIB Antibody尼克酰腺嘌呤二核苷磷氧化4(NOX4)
淡紫擬青霉菌(現(xiàn)1)鋅指蛋白ZBTB7C抗體Anti-NFKB1 Antibody尼克酰腺嘌呤二核苷磷氧化1(NOX1)
固生蛋白M抗體嗜鞣管囊酵母人骨骼肌細(xì)胞提取物
纖維細(xì)胞源性蛋白志賀毒性大腸埃希氏菌人滑膜細(xì)胞提取物
末端多聚腺苷2蛋白抗體總狀橫梗霉人椎間盤髓核細(xì)胞提取物
精神發(fā)育遲滯相關(guān)蛋白Oligophrenin-1抗體產(chǎn)棒桿菌人關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞提取物
ULK1和ULK2抑制劑(MRT68921鹽酸鹽)蘇云金芽胞桿幕蟲亞種 氟酸鈉CD59蛋白Elisa
溫特曲霉原變種 硫酸氫鈉甲基酮Elisa
季也蒙假絲酵母 鉍酸鈉芳香化Elisa
細(xì)鏈格孢 銻酸鈉酪蛋白激2Elisa
青枯假單胞* 鋁酸鈉核糖體S6蛋白激Elisa
產(chǎn)酸克雷伯氏 硫酸鈉視黃乙酰轉(zhuǎn)移Elisa
糾纏青霉 硫化鈉脂質(zhì)過氧化物Elisa
腸外致病性大腸桿 草酸鈉1,25-二羥基維生D3Elisa
灰腐質(zhì)霉 四苯鈉25羥基維生D3Elisa
禽腺病Ⅷ型 磷酸三鈉促性腺Elisa
越桔假絲酵母 無水磷酸氫二鈉纖維Elisa
馬齒莧叉梗孢 磷酸氫二鈉蛋白Elisa
釀酒酵母 無水磷酸二氫鈉乙酰酯Elisa
鳳尾菇、漏斗狀側(cè)耳(可訂購) 磷酸二氫鈉谷氨酸脫羧Elisa
黑曲霉 硫代硫酸鈉γ-氨基丁酸轉(zhuǎn)氨Elisa