以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
PI3K抑制劑 | 3-Methyladenine | 1mL(10mM)|50mg|100mg|200mg|500mg | 1~3天 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
英文名稱:3-Methyladenine 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|50mg|100mg|200mg|500mg 3-Methyladenine是一種選擇性的PI3K抑制劑,能夠作用于Vps34和PI3Kγ,IC50值為25μM和60μM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):5142-23-4 別名:3-MA 純度:99.84% 分子量:149.15 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門(mén)的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
閃光須霉磷化非受體酪激c-Abl抗體Human ARHGAP1 ELISA Kit人轉(zhuǎn)錄中介因子1-β(TRIM28/KAP1/RNF96/TIF1B)免疫試劑盒
少根根霉東京變種磷化非受體酪激c-Abl抗體Human ANGPTL5 ELISA Kit人轉(zhuǎn)錄因子抗體-1(ATF-1)免疫試劑盒
黑曲霉磷化非受體酪激c-Abl抗體Human ARK5 ELISA Kit人轉(zhuǎn)錄因子SOX-5(SOX5)免疫試劑盒
麥根腐平臍蠕孢磷化非受體酪激c-Abl抗體Human ARHGDIB(Rho GDP-dissociation inhibitor 2) ELISA Kit人轉(zhuǎn)錄因子SOX-4(SOX4)免疫試劑盒
東方伊薩酵母磷化非受體酪激c-Abl抗體Human ANKZF1 ELISA Kit人轉(zhuǎn)錄因子E2F1 免疫試劑盒
大豆慢生根瘤菌磷化非受體酪激c-Abl抗體Human ANGPTL7( Angiopoietin-related protein 7) ELISA Kit人轉(zhuǎn)錄因子AP-1 免疫試劑盒
毛相思根瘤菌尾部結(jié)構(gòu)蛋白抗體Human ARL1(ADP-ribosylation factor-like protein 1) ELISA Kit人轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β誘導(dǎo)蛋白IG-H3(TGFBI/BIGH3)免疫試劑盒
高山被孢霉5號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框19抗體Human ANP32A ELISA Kit人轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β受體3(TGFBR3)免疫試劑盒
釀酒酵母9號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框139抗體Human ARL4 ELISA Kit人轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β受體2(TGF-βR2)免疫試劑盒
單色下皮黑孔菌9號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框140抗體Human APC1 ELISA Kit人轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β受體1(TGFBR1)免疫試劑盒
大腸埃希氏桿菌9號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框142抗體Human ATG7(Autophagy-related protein 7) ELISA Kit人轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β激蛋白22(TSC22)免疫試劑盒
類(lèi)芽孢桿菌屬9號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框163抗體Human BBS8 ELISA Kit人轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β3(TGF-β3)免疫試劑盒
迪氏野野村氏菌9號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框169抗體Human ATIC ELISA Kit人轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β2(TGFβ2)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌9號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框173抗體Human ATPB(ATP synthase subunit beta) ELISA Kit人轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)免疫試劑盒
構(gòu)巢曲霉9號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框21抗體Human ARP2 ELISA Kit人轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子α(TGF-α)免疫試劑盒
惡臭假單胞菌磷化絲/蘇蛋白激II β/casein kinase IIβ抗體Human ATR ELISA Kit人轉(zhuǎn)谷酰2C多肽(TGM2)免疫試劑盒
荷氏科爾韋爾氏菌Colwellia│hornerae 質(zhì)量規(guī)格:BRN端中段骨鈣試劑盒開(kāi)環(huán)異落葉松樹(shù)脂酚
暗黑鏈霉菌Streptomyces│atratus 質(zhì)量規(guī)格:>96%,Tech GradeN端前腦鈉試劑盒卡比多巴
漢遜德巴利酵母Debaryomyces│hansenii 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRNOD樣受體試劑盒咖啡乙酯
PI3K抑制劑根瘤 3-乙?;剿崮蚱べ|(zhì)3Elisa
釀酒酵母 3-氨基氧基硅烷尿氮Elisa
土星漢遜酵母 4-乙酰基苯酸尿酸Elisa
雜硅鹽礦物節(jié)桿 3-乙?;剿崮蛘{(diào)蛋白Elisa
粉紅聚端孢 4-乙酰苯酸尿調(diào)Elisa
消燈輻照強(qiáng)度指示卡 3-氨基苯酸尿白蛋白Elisa
釀酒酵母 4-甲氧基苯基溴化鎂檸檬酸合Elisa
B1速測(cè)卡 烯基溴化鎂凝聚Elisa
新疆鹽地桿 烯基(甲基)二甲基硅烷凝血Elisa
擴(kuò)展青霉 烯鎂凝血抗凝血復(fù)合物Elisa
酮丁梭 烯基基硅烷凝血調(diào)節(jié)蛋白Elisa
紅色蠟?zāi)?/span> 3-氨基三乙氧基硅烷凝血原Elisa
側(cè)孢短芽孢桿 3-氨基三乙氧基硅烷凝血原片段F1+2Elisa
大腸桿 叔丁基二甲基硅烷凝血因子ⅦElisa
膠孢 叔丁基二甲基硅烷凝血因子ⅧElisa