商品介紹:
SB-3CT是一種有效的選擇性基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-2和-9抑制劑。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):292605-14-2 純度:99.32% 分子量:306.4 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時(shí)內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
豇豆慢生根瘤菌有絲分裂相關(guān)蛋白INSC抗體Human RAD17 ELISA Kit粘蛋白/粘液5AC(MUC5AC)
阪崎腸桿菌磷化核因子NFκB抑制蛋白激i抗體Human WNT5A(Protein Wnt-5a) ELISA Kit增殖誘導(dǎo)配體(APRIL)
淡黃曲霉RAN結(jié)合蛋白7抗體Human RAD18 ELISA Kit早期生長反應(yīng)因子1(EGR1)
黑曲霉兔抗人γ-鏈Human RAD23A ELISA Kit早期前列腺癌抗原2(EPCA2)
裂孔平伏菌免疫球蛋白超家族成員B抗體Human RAB27B(Ras-related protein Rab-27B) ELISA Kit早期活化抗原CD69(CD69)
菊苣假單胞菌六磷肌激3抗體Human CDH11(Cadherin-11) ELISA Kit早老2(PS-2)
釀酒酵母干擾kappa蛋白抗體Human MUC4(Mucin-4) ELISA Kit早老1(PS-1)
煙芽孢桿菌白介1α/IL-1α抗體Human IL15RA(Interleukin-15 receptor subunit alpha) ELISA Kit再生胰島衍生1α/胰石蛋白/胰線蛋白(REG1A)
枯草芽孢桿菌白介1α/IL-1α抗體Human Rabenosyn 5 ELISA Kit再生基因蛋白IV(REG-4)
釀酒酵母磷化白介2受體β鏈抗體Human RABAC1 ELISA Kit載脂蛋白L1(APOL1)
華根霉胰島樣蛋白3抗體Human GHR(Growth hormone receptor) ELISA Kit載脂蛋白H(Apo-H)
黃傘(可訂購)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)核信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白a1抗體Human RAB11FIP1 ELISA Kit載脂蛋白E(Apo-E)
畢赤酵母重組人白介18抗體Human RABEPK ELISA Kit載脂蛋白C3(Apo-C3)
弗氏鏈霉菌α重鏈H4抗體Human RABEP2 ELISA Kit載脂蛋白C3(Apo C3)
天花板節(jié)桿菌免疫球蛋白結(jié)合蛋白-1抗體Human RABEP1 ELISA Kit載脂蛋白C2(Apo-C2)
亞黑管孔菌胰島樣生長因子不穩(wěn)定亞基ALS抗體Human RAB11FIP2 ELISA Kit載脂蛋白C1(APO-C1)
雪白紅鏈霉菌Streptomyces│niveoruber 質(zhì)量規(guī)格:>99.5%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)去氫鉤藤堿
淡紫擬青霉Paecilomyce│lilacinus 質(zhì)量規(guī)格:>99.0%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)白當(dāng)歸
立枯絲核菌Thanatephorus│cucumeris (A.B. Frank) Donk 質(zhì)量規(guī)格:>99.5%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)知母皂苷A3
MMP-2和MMP-9抑制劑(SB-3CT)普利茅斯沙雷氏 3,5-二肌紅蛋白Elisa
痢疾志賀氏 3,5-二溴脫氧核糖核酸ⅠElisa
赭鱗蘑菇 4-(磺酸)N-羥乙酰神經(jīng)氨酸Elisa
俄勒岡靈芝 甘露聚糖Elisa
苜蓿中華根瘤 (R)-4-苯基-2-惡唑烷酮熱休克蛋白-72Elisa
扣囊復(fù)膜孢酵母 N-苯基-1-萘總抗氧化能力Elisa
小馬勃 2-苯基丁酸隱孢子蟲IgG抗體Elisa
灰黃淺黃酵母 4-氟-2-三氟甲成纖維生長因子9Elisa
貝氏葡萄座腔 1-代萘隱孢子蟲Elisa
擬鷲峰假絲酵母 ?;⌒图∷峒lisa
枯草芽孢桿 聚乙二單硬脂酸酯木聚糖Elisa
紅色蠟?zāi)?/span> 聚乙二單硬脂酸酯褪黑Elisa
粘質(zhì)沙雷氏 聚乙二單硬脂酸酯副流感病3型Elisa
食砜節(jié)桿 聚乙二單硬脂酸酯呼腸弧病Elisa
球孢枝孢 聚乙二單硬脂酸酯副流感病3抗體Elisa