以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
IRAK inhibitor4(trans)是IRAK inhibitor4的trans形式,IRAK inhibitor4是IRAK4的有效抑制劑。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 純度:99.50% 分子量:620.66 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
總狀毛霉G蛋白偶聯(lián)受體GPR91蛋白抗體Human GPER(G-protein coupled estrogen receptor 1) ELISA Kit腎上腺髓質(zhì)(ADM)免疫試劑盒
福山假絲酵母葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白8抗體Human VWA1 ELISA Kit神經(jīng)型一氧化氮合成(nNOS)免疫試劑盒
玉米黑粉菌糖蛋白C抗體Human WDFY4 ELISA Kit神經(jīng)膠質(zhì)纖維性蛋白(GFAP)免疫試劑盒
豌豆根瘤菌γ基丁運(yùn)載蛋白1抗體Human VTI1B ELISA Kit凝血抗凝血復(fù)合物(TAT)免疫試劑盒
根瘤菌GATA結(jié)合蛋白2抗體Human VWA2 ELISA Kit腦鈉/腦鈉尿肽(BNP)免疫試劑盒
尖角凸臍蠕孢生長(zhǎng)休止特定蛋白7抗體Human WDR1 ELISA Kit內(nèi)皮型一氧化氮合成(eNOS)免疫試劑盒
深層大洋芽孢桿菌磷化谷受體1抗體Human WDR13 ELISA Kit內(nèi)皮1(ET-1)免疫試劑盒
假單胞菌G蛋白偶聯(lián)受體116抗體Human ZP3(Zona pellucida sperm-binding protein 3) ELISA Kit內(nèi)(ET)免疫試劑盒
釀酒酵母鳥苷調(diào)節(jié)蛋白12抗體Human WAPL/WAPAL ELISA Kit免疫球蛋白G(IgG)免疫試劑盒
*禾谷鐮刀菌磷化膠質(zhì)纖維性蛋白抗體Human WSB2 ELISA Kit類風(fēng)濕因子(RF)免疫試劑盒
大腸埃希菌磷化G基丁B型受體2抗體Human WFDC1 ELISA Kit巨噬移動(dòng)抑制因子(MIF)免疫試劑盒
羊泰勒蟲(崇信株)磷化G基丁B型受體2抗體Human MC4R(Melanocortin receptor 4) ELISA Kit巨噬炎性蛋白3α(MIP-3α/CCL20)免疫試劑盒
凍干粉 厭氧亞硫鹽還原梭菌(定量) 生長(zhǎng)分化因子10抗體(TGF-β超家族10)Human WDR40A ELISA Kit巨噬炎性蛋白1α(MIP-1α/CCL3)免疫試劑盒
慢生根瘤菌G蛋白偶聯(lián)受體LOC51210蛋白抗體Human WDR45 ELISA Kit膠原I(Collagenase I)免疫試劑盒
香菇生長(zhǎng)抑制蛋白34Human WDR4 ELISA Kit甲狀旁腺激(PTH)免疫試劑盒
花腐鐮孢生長(zhǎng)激抗體Human WDR5 ELISA Kit基質(zhì)金屬蛋白11(MMP11)免疫試劑盒
醋化醋桿菌Acetobacter│aceti 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5%(GC)7-乙氧基莫諾苷
鏈霉菌Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格:standard for GC山茱萸新苷I
大腸埃希氏菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5%(GC)4-羥基異亮
IRAK4抑制劑(IRAK inhibitor 4 trans)異丁司特(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Primaquine phosphate早期內(nèi)吞體相關(guān)蛋白1抗體包裝100g
異環(huán)磷酰(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: D-(-)-Luciferin 胞吞調(diào)控蛋白Eps15抗體包裝500g
異環(huán)磷?;衔?/span>III(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Marbofloxacin真核翻譯起始因子4E抗體包裝100mg
異喹啉物(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Ibutamoren Mesylate,MK-0677核輸出蛋白5抗體包裝50mg
異維A(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Agar腸致病性大腸桿菌抗體包裝1g
異香草(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Trifluridine; TrifluorothymidineE4F轉(zhuǎn)錄因子1抗體包裝5g
(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Cocarboxylase tetrahydrate睪調(diào)節(jié)凋亡誘導(dǎo)和腫瘤抑制基因抗體包裝250g
銦標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μG/ML,基體:1.0 mol/...英文名稱: Gatifloxacin mesylate聚合延伸因子2抗體包裝1g
吲達(dá)帕(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Perospirone hydrochloride聚合延伸因子抗體包裝5g
吲哚布芬(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Tirapazamine(SR259075; Win59075; SR4233)神經(jīng)生長(zhǎng)因子調(diào)控抑制蛋白抗體包裝1g
吲哚美辛(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Dextrin內(nèi)皮分化鞘脂G蛋白偶聯(lián)受體1抗體包裝5g
熒光母(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Benzidamine HCl紅分化相關(guān)因子1抗體包裝100g
熒光鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Sephadex G-50微管相關(guān)蛋白樣蛋白3抗體包裝25g
右雷佐生;右亞(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Sephadex G-50內(nèi)皮抑/內(nèi)皮他丁抗體包裝5g
右旋蘭索拉唑(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: (S)-(+)-Mandelic acid雌受體β抗體包裝1g