以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
商品介紹:
Astragaloside IV是從黃芪中分到的皂苷類物質(zhì),能夠抑制ERK1/2和JNK的激活,在乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231中,能夠下調(diào)(MMP)-2,(MMP)-9的信號通路。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:84687-43-4 純度:99.15% 分子量:784.97 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時,加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細(xì)胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
破傷風(fēng)梭菌β淀粉樣肽1-28(多肽蛋白)Anti-ADGRE1 Antibody表面活性物質(zhì)關(guān)聯(lián)蛋白C(SPC)
變灰青霉β淀粉樣肽(1-40)(多肽蛋白)Anti-ADGRD1 Antibody表面活性物質(zhì)關(guān)聯(lián)蛋白B(SPB)
貝倫格葡萄座腔菌梨生?;屯蛔冃?/span>β淀粉樣肽1-40Anti-ADGRE2 Antibody表面活性物質(zhì)關(guān)聯(lián)蛋白A(SPA)
泡盛曲霉β淀粉樣肽(1-42)Anti-ADGRB3 Antibody表膠質(zhì)蛋白(PRX)
Bacteroides dorei糖尿病相關(guān)肽(胰島淀粉樣肽)Anti-ADGRE2 Antibody表睪(ET)
杏鮑菇瓜環(huán)肽Anti-ADGRE3 Antibody芐1關(guān)聯(lián)自噬相關(guān)關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子(Barkor)
熱吸水鏈霉菌銹赤亞種2型豬鏈球菌菌體蛋白Anti-ADGRF1 Antibody芐1(BECN1)
嗜冷咸海鮮球菌胰高血糖樣肽-1(多肽)Anti-ADGRE4P Antibody吡哆磷磷(PDXP)
渭香1號腎上腺髓質(zhì)蛋白(N端20肽)Anti-ADGRE4P Antibody吡哆激(PDXK)
枯草芽孢桿菌晚期糖基化終末產(chǎn)物AGEsAnti-ADGRF4 Antibody乙肼裂解(NRD1)
木賊鐮孢菌晚期糖基化終末產(chǎn)物蛋白對照品Anti-ADGRF4 Antibody基乙-N-甲基轉(zhuǎn)移(PNMT)
大腸埃希菌內(nèi)皮-1(蛋白多肽 活性蛋白)Anti-ADGRF3 Antibody酚磺基轉(zhuǎn)移(PST)
枯草芽胞桿菌枯草亞種粘附多肽GRGDSAnti-ADGRF3 Antibody羥化(PAH)
錳氧化褐黃海水菌腺苷環(huán)化激活肽 1-38(全蛋白)Anti-ADGRF5 Antibody(ANLN)
果生鏈核盤菌髓鞘堿性蛋白(多肽抗原)Anti-ADGRF5 Antibody保護(CD59)
膠凍樣類芽孢桿菌囊三肽/三肽囊/雞法氏囊三肽Anti-ADGRG1 Antibody胞質(zhì)分裂作用因子3(DOCK3)
Bcl-2轉(zhuǎn)錄抑制因子1抗體刺孢吸水鏈霉菌北京變種大鼠子宮組織提取物
骨骼肌細(xì)胞線粒體膜蛋白PARL抗體吸水鏈霉菌應(yīng)城變種大鼠子宮頸組織提取物
多核苷磷化蛋白抗體諾爾斯氏鏈霉菌大鼠輸尿管組織提取物
卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白139抗體菲律賓鏈霉菌大鼠尿道組織提取物
ERK1/2和JNK抑制劑(Astragaloside IV)薏苡鏈格孢 Sarcandrolide D
球形賴氨酸芽孢桿 Rauvotetraphylline E
產(chǎn)單核李氏桿 Raucaffricine
大豆慢生根瘤 Protoplumericin A
黑腐皮殼 霹靂蘿芙辛堿
南海紅球 Ocotillone
豬丹絲 蕊木堿甲酯
姬松茸* 辛夷烯酮
匍枝根霉(黑根霉) 7-Geranyloxy-5-methoxycoumarin
黃曲霉 Larixinol
香菇 Jolkinol A
橙色鹽單胞 2,5,14-三乙酰氧基-3-苯甲?;趸?8,15-二羥基-7-異丁酰氧基-9-煙酰氧基氧基-6(
彩色豆馬勃 Isokadsurenin D
鼠李糖乳桿 Isoerysenegalensein E
榿木鏈霉 Erysenegalensein E