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上海谷研實業(yè)有限公司 |
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| 參考價 | 面議 |
更新時間：2022-04-21 10:04:41瀏覽次數(shù)：250
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 20次|50次 |
|---|---|---|---|
| 貨號 | GOY-01X9534 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工 |
| 主要用途 | 公司產(chǎn)品僅供科研 | 英文名稱 | Annexin?V-EGFP?Apoptosis?Detection?Kit |
商品介紹：
本試劑盒是用EGFP標(biāo)記的重組人Annexin V來檢測細(xì)胞凋亡時出現(xiàn)在細(xì)胞膜表面的磷酯酰絲氨酸的一種細(xì)胞凋亡檢測試劑盒。一個包裝的本試劑盒共可以檢測20個樣品。可以使用流式細(xì)胞儀、熒光顯微鏡或其它熒光檢測設(shè)備進(jìn)行檢測。 試劑盒組份： Annexin V-EGFP—————————100μl Annexin V-EGFP結(jié)合液——————12ml 碘化丙啶染色液—————————220μl Annexin是一類廣泛分布于真核細(xì)胞細(xì)胞漿內(nèi)鈣離子依賴的磷酯結(jié)合蛋白，參與細(xì)胞內(nèi)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。但僅Annexin V被報道可以調(diào)控一些PKC的活性。 Annexin V選擇性結(jié)合磷酯酰絲氨酸(phosphatidylserine，簡稱PS)。磷酯酰絲氨酸主要分布在細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)，即與細(xì)胞漿相鄰的一側(cè)。在細(xì)胞發(fā)生凋亡的早期，不同類型的細(xì)胞都會把磷酯酰絲氨酸外翻到細(xì)胞表面，即細(xì)胞膜外側(cè)。磷酯酰絲氨酸暴露到細(xì)胞表面后會促進(jìn)凝血和炎癥反應(yīng)。而Annexin V和外翻到細(xì)胞表面的磷酯酰絲氨酸結(jié)合后可以阻斷磷酯酰絲氨酸的促凝血和促炎癥反應(yīng)活性。 用帶有綠色熒光的熒光探針EGFP標(biāo)記的Annexin V，即Annexin V-EGFP，就可以用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡非常簡單而直接地檢測到磷酯酰絲氨酸的外翻這一細(xì)胞凋亡的重要特征。 本試劑盒還提供了碘化丙啶染色液，碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)可以染色壞死細(xì)胞或凋亡晚期喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞，呈現(xiàn)紅色熒光。對于壞死細(xì)胞，由于細(xì)胞膜的完整性已經(jīng)喪失，Annexin V-EGFP可以進(jìn)入到細(xì)胞漿內(nèi)，與位于細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)的磷酯酰絲氨酸結(jié)合，從而也使壞死細(xì)胞呈現(xiàn)綠色熒光。 綜上所述，用Annexin V-EGFP和碘化丙啶染色后，正常的活細(xì)胞不被Annexin V-EGFP和碘化丙啶染色；凋亡早期的細(xì)胞僅被Annexin V-EGFP染色，碘化丙啶染色呈陰性；壞死細(xì)胞和凋亡晚期的細(xì)胞可以同時被Annexin V-EGFP和碘化丙啶染色。 儲存條件：4℃避光，有效期6個月。 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹：
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
| Annexin V-EGFP Apoptosis Detection Kit | 20次|50次 | 1～3天 |
操作步驟：
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer（10×）稀釋成1×Binding buffer工作液備用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml無菌去離子水）。
2) 對于懸浮細(xì)胞，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞，要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞，胰酶消化時間不宜過長或過短，最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時，加入細(xì)胞培養(yǎng)液，將細(xì)胞輕輕吹打下來，轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后，加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌，離心收集細(xì)胞，共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重懸細(xì)胞，使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液（細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，輕輕混勻，室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測：
染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測（1小時內(nèi)檢測）。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組，正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析，繪制雙色散點(diǎn)圖（two-color dot plot），F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo)，PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時，活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光，早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光，晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測：
染色孵育后涂片，顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞，細(xì)胞核顯示紅色，膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
血管緊張轉(zhuǎn)化2(ACE2)英文名稱：ACE2 ELISA Kit芳香烴受體抗體包裝5g
血管緊張轉(zhuǎn)化(ACE)英文名稱：ACE ELISA Kit吸引抗體包裝1g
血管緊張原(aGT)英文名稱：aGT ELISA Kit腺苷三磷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1抗體包裝5g
血管緊張Ⅱ受體2(AT2R)英文名稱：AT2R ELISA Kit蛋白激B2包裝1g
血管緊張Ⅱ(ANG-Ⅱ)英文名稱：ANG-Ⅱ ELISA Kit血管生成2抗體包裝25g
血管緊張Ⅰ(Ang-Ⅰ)英文名稱：Ang-Ⅰ ELISA Kit芳香化/色P450/雌激合成抗體包裝5g
血管緊張1-7(Ang1-7)英文名稱：Ang1-7 ELISA Kit腺苷A2A受體抗體包裝1g
血管活性腸肽(VIP)英文名稱：VIP ELISA Kit蛋白激A錨定蛋白95抗體包裝25g
溴脫氧核苷尿嘧啶(BrdU)英文名稱：BrdU ELISA Kit頂膜鈉依賴性膽鹽轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白抗體包裝5g
雄烯二(ASD)英文名稱：ASD ELISA Kit去整合樣金屬蛋白8抗體包裝10MG
雄激受體(AR)英文名稱：AR ELISA Kit芳香乙酰脫乙?；鶚拥鞍?抗體包裝50MG
性激結(jié)合球蛋白(SHBG)英文名稱：SHBG ELISA KitACN9蛋白抗體包裝250mg
信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子7(Smad7)英文名稱：Smad7 ELISA Kit雙鏈RNA腺苷脫基抗體（N端）包裝50MG
信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子1(Smad1)英文名稱：Smad1 ELISA Kit腺苷單磷活化蛋白激α2抗體包裝5g
新生狀腺(NN-T4)英文名稱：NN-T4 ELISA Kit腺苷激抗體包裝25mg
肌動蛋白結(jié)合蛋白DOC6抗體白介4(IL4)Pritelivir (BAY 57-1293) is a potent helicase primase inhibitor, exhibiting anti
Annexin V-EGFP細(xì)胞凋亡檢測試劑盒佩特曲霉 環(huán)磺酰氯MEK激酶檢測試劑盒
膠孢 2-乙基吡MEST檢測試劑盒
美麗短芽孢桿 1-萘酸microRNA-210檢測試劑盒
奇異球 反式-鄰溴肉桂Spondin-2；mindin檢測試劑盒
根瘤 1-溴-3,4,5-三氟苯MRP-14檢測試劑盒
紅曲紅曲 4-溴-3-甲基吡唑腎上腺髓質(zhì)前體中段肽檢測試劑盒
短桿狀馬賽 4-甲酸叔丁酯MxA蛋白檢測試劑盒
傘枝犁頭霉 2,5-二溴對苯二甲酸NADH-色素b5還原酶檢測試劑盒
摩洛哥芽孢桿 4-氯-6-乙基-5-氟嘧啶Na-K-ATP酶檢測試劑盒
囊孔附毛 L-(+)-扁桃酸乙酯nectin-4檢測試劑盒
膠孢 環(huán)己基雙苯膦氧化物NOD樣受體1檢測試劑盒
黑曲霉 N,N'-(4,4'-亞甲基二苯基)雙馬來酰亞NOD樣受體-2檢測試劑盒
*蟲擬蠟 鄰甲基三氟甲苯跨膜受體蛋白Notch-1檢測試劑盒
瓦克青霉 二丁基二硫代氨酸鋅N端前腦鈉素檢測試劑盒
印度不動桿 2,4,5-基噻唑N端中段骨鈣素檢測試劑盒
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