以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
中文名稱(chēng) | 英文名稱(chēng) | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
HIF-1α抑制劑(Oltipraz) | Oltipraz | 1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg|200mg|500mg | 1~3天 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
Oltipraz抑制HIF-1α激活,這種作用具時(shí)間依賴(lài)性,濃度≥10μM時(shí)*廢除HIF-1α誘導(dǎo),Oltipraz抑制HIF-1α,IC50為10μM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):64224-21-1 別名:RP 35972;NSC 347901 純度:99.15% 分子量:226.34 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門(mén)的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
釀酒酵母羅丹明標(biāo)記的驢抗豚鼠IgGAnti-ACSS1 Antibody補(bǔ)體成分3a受體1(C3aR1)
榛色青霉羅丹明標(biāo)記的鼠抗人IgG單克抗體Anti-ACTBL2 Antibody補(bǔ)體成分3(C3)
絲蘭輪紋斑菌膠體金標(biāo)記的鼠抗人IgG單克抗體Anti-ACTBL2 Antibody補(bǔ)體成分2(C2)
塊鱗灰傘FITC標(biāo)記的鼠抗人IgG單克抗體Anti-ACTG2 Antibody補(bǔ)體成分1s(C1s)
金黃色葡萄球菌堿性磷(AP)標(biāo)記的鼠抗人IgG單克抗體Anti-ACTC1 Antibody補(bǔ)體成分1r(C1r)
*灰葡萄孢PE-Cy3標(biāo)記的鼠抗人IgG單克抗體Anti-ACVR1C Antibody補(bǔ)體成分1q子成分樣蛋白1(C1qL1)
產(chǎn)單核李氏桿菌PE-CY5標(biāo)記的鼠抗人IgG單克抗體Anti-ACTIN Antibody補(bǔ)體成分1q子成分C(C1qC)
產(chǎn)氣莢膜梭菌 E型APC標(biāo)記的鼠抗人IgG單克抗體Anti-ACVRL1 Antibody補(bǔ)體成分1q子成分A(C1qA)
多產(chǎn)色鏈霉菌Alexa Fluor 350標(biāo)記的鼠抗人IgG單克抗體Anti-ADAM10 Antibody補(bǔ)體C5轉(zhuǎn)化(C5c)
雙孢蘑菇(白蘑菇、洋蘑菇)Alexa Fluor 488標(biāo)記的鼠抗人IgG單克抗體Anti-ADAMTS18 Antibody補(bǔ)體C3轉(zhuǎn)化(C3c)
新月彎孢Alexa Fluor 555標(biāo)記的鼠抗人IgG單克抗體Anti-ADAM32 Antibody補(bǔ)體3a(C3a)
博斯氏菌屬Alexa Fluor 647標(biāo)記的鼠抗人IgG單克抗體Anti-ADAMTS19 Antibody補(bǔ)體1抑制因子(C1INH)
茶藨子葡萄座腔菌PE-Cy5.5標(biāo)記的鼠抗人IgG單克抗體Anti-ADAR1 Antibody博來(lái)霉水解(BLMH)
擬可可毛球二孢PE-Cy7標(biāo)記的鼠抗人IgG單克抗體Anti-ADARB1 Antibody玻璃體蛋白(VIT)
嗜糖土地芽孢桿菌Cy5.5標(biāo)記的鼠抗人IgG單克抗體Anti-ADCK1 Antibody脫氫磷(PDP)
乳桿菌屬Cy7標(biāo)記的鼠抗人IgG單克抗體Anti-ADCY1 Antibody脫氫激同工4(PDK4)
腸道71型/手足口病抗體巴氏葡萄球菌大鼠小腦組織提取物
多形性腺瘤基因樣蛋白2抗體海濱芽孢桿菌大鼠腦膜組織提取物
Pantophysin抗體類(lèi)芽孢桿菌大鼠腦動(dòng)脈血管組織提取物
橋粒斑菲蛋白1抗體肉葡萄球菌大鼠甲狀腺組織提取物
HIF-1α抑制劑(Oltipraz)壺黑蛋巢布諾德變型 14β-Benzoyloxy-2-deacetylbaccati
金針菇 10-Hydroxyneoline
變異鏈球 10-Hydroxy-16-epiaffinine
產(chǎn)堿假單胞 1,7-二表-8,15-柏木烷二
褐犁頭霉 Koumine N-oxide
側(cè)孢短芽孢桿 6α,16,18-Trihydroxycleroda -3,13
人參土尼阿巴 2',4',5'-Trimethoxy-2'',2''- dim
蘋(píng)果黑腐皮殼 α-Epoxydihydroartemisinic acid
圈卷產(chǎn)色鏈霉 Yucalexin P-17
魯考弗美奇酵母 細(xì)葉桉萜酯 A
殺蟲(chóng)貪銅 銀線(xiàn)草 C
釀酒酵母 Sambutoxin
節(jié)桿 Pterokaurene L3
解淀粉周培瑾氏 Pelirine
釀酒酵母 Ophiopogonanone C