以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
USP7抑制劑(HBX 19818) | HBX 19818 | 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg | 1~3天 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
HBX19818是USP7抑制劑,IC50為28.1uM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:1426944-49-1 純度:96.84% 分子量:421.96 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時(shí)內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
紅色蠟?zāi)⒁环N腫瘤抑制基因抗體(N端)Anti-CASP8(P10) AntibodyN端中段骨鈣(N-MID-OT)
香港洛克氏菌腺苷單磷活化蛋白激α1/AMPK α 1抗體Anti-CASP8 AntibodyN端外顯肽(Ext-N)
白僵菌維生K依賴的蛋白C重鏈抗體Anti-CASP8(P18) AntibodyN端前腦鈉(NT-proBNP)
長蠕孢菌神經(jīng)叢蛋白A1抗體Anti-CASP8 AntibodyNOGO-A抗體(Nogo-A Ab)
p21激活激4抗體Anti-CASP9(small)(p10) AntibodyNOD樣受體(NLR)
Aquimonas磷化p21激活激4/5/6抗體Anti-CASP8(P18) AntibodyNADPH氧化3(NOX3/MOX2)
Microbacterium marinilacus磷化p21激活激1/2抗體Anti-CASP9(p35) AntibodyNADPH氧化1(NOX1/MOX1/NOH1)
變異鏈霉菌磷化p21激活激1/2抗體Anti-Caspase-1(P20)/CASP1 AntibodyNa+/H+交換體3(NHE3)
干草鞘單胞菌磷化p21激活激2抗體Anti-CASP9(large) AntibodyN(ε)羧乙基賴(CEL)
蠟狀芽孢桿菌磷酯Cγ2抗體Anti-Caspase-9 p35/Casp9 AntibodyMYC誘導(dǎo)核抗原(MINA)
枯草芽胞桿菌磷化血小板源性生長因子受體-α抗體Anti-CAST AntibodyMAX二聚化蛋白1(mxd1)
產(chǎn)堿普羅威登斯菌磷化血小板源性生長因子受體-α抗體Anti-CAT AntibodyMAP磷雙特異性磷1(DUSP-1)
假單胞菌P73腫瘤抑制基因抗體Anti-CAV1 AntibodyM2腎激(M2-PK)
鹽假單胞菌表觀抑制因子Polycomb家族成員PCGFl蛋白抗體Anti-CASR Antibody(PB0970)L選擇(L-Selectin/CD62L)
蘇云金芽孢桿菌擬步行甲亞種G蛋白偶聯(lián)嘌呤受體p2y10抗體Anti-CAV2 AntibodyL-乳脫氫(L-LDH)
哈茨木霉腺苷環(huán)化激活肽-27/38抗體Anti-CAV2 Antibody(PB0108)L-解(PAL)
鏈霉菌屬菌種Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
非O1群霍亂弧菌Vibrio│cholerae non-O1 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌Bacillus│firmus Bredemann and Werner 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
USP7抑制劑(HBX 19818)鼎湖鱗傘(只能確定到屬) 麥康凱瓊脂2號色P45027B1Elisa
謝瓦曲霉 纖維剛果紅培養(yǎng)基可溶性血管內(nèi)皮生長因子受體1Elisa
鴨瘟病抗血清 姜氏培養(yǎng)基(不含瓊脂)可溶性FMS樣酪氨酸激1Elisa
草酸青霉 姜氏瓊脂培養(yǎng)基游離甲狀腺Elisa
玫瑰產(chǎn)色鏈霉 解磷細(xì)培養(yǎng)基(有機(jī)磷細(xì)培養(yǎng)基)游離狀腺原氨酸Elisa
光帽鱗傘 固氮根瘤培養(yǎng)基可溶性CD44變體9Elisa
水稻節(jié)桿 聯(lián)合固氮培養(yǎng)基Periostin蛋白Elisa
木霉 固氮用阿須貝氏培養(yǎng)基X-框結(jié)合蛋白1Elisa
黃色雙孢放線 無機(jī)磷細(xì)培養(yǎng)基肌依賴1αElisa
節(jié)桿 去氧膽酸鹽枸櫞酸鹽乳糖蔗糖瓊脂總膽汁酸Elisa
墳?zāi)构?jié)桿 Honda氏產(chǎn)肉湯尿酸Elisa
樟疫霉 明膠蛋白胨肌酐Elisa
貴州青霉 玉米浸粉尿氮Elisa
芥黃蜜環(huán) MPC瓊脂培養(yǎng)基白介23Elisa
耐酪酸冢村 接觸皿培養(yǎng)基白介22Elisa