商品介紹:
Fasudil Hydrochloride是一種有效的ROCK-II,PKA,PKG,PKC和MLCK的抑制劑,Ki值分別為0.33μM,1.6μM,1.6μM,3.3μM和36μM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):105628-07-7 別名:HA-1077;AT-877;Fasudil HCl 純度:99.92% 分子量:327.83 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
產(chǎn)品屬性:
中文名稱:ROCK-II/PKA/PKG/PKC/MLCK抑制劑
英文名稱:Fasudil Hydrochloride
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|100mg|200mg|500mg
發(fā)貨周期:1~3天
公司產(chǎn)品僅用于科研
細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面:
細(xì)胞生物學(xué)的研究?jī)?nèi)容十分廣泛,主要包括:
①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究;
②生物膜與細(xì)胞器的研究;
③細(xì)胞骨架體系的研究;
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控;
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控;
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡);
⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化;
⑧細(xì)胞工程.
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
Hymenobacter胰島樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白5抗體Human RCBTB2 ELISA Kit周期依賴性激4(CDK-4)
瑞士乳桿菌胰島樣生長(zhǎng)因子1抗體Human RCC1 ELISA Kit周期依賴性激2(CDK-2)
豇豆慢生根瘤菌胰島樣生長(zhǎng)因子-II抗體Human RCL1 ELISA Kit周期依賴性激1(CDK-1)
釀酒酵母白介10抗體Human Recoverin ELISA Kit重組激活基因2(RAG-2)
蠟狀芽孢桿菌白介13抗體Human Recoverin ELISA Kit重組激活基因1(RAG-1)
弗氏志賀氏菌白介-17抗體Human RCBTB2 ELISA Kit重去甲腎上腺(NE-B)
美澳型核果褐腐病菌白介-18/干擾γ誘導(dǎo)因子抗體Human RCC1 ELISA Kit腫瘤血管生長(zhǎng)因子(TAF)
藤黃微球菌白介1受體相關(guān)蛋白樣1前體蛋白抗體Human RCHY1 ELISA Kit腫瘤相關(guān)抗原(TAA)
單核增生李斯特CMCC(B)54002白介1β/IL-1β抗體Human RBM26 ELISA Kit腫瘤特異性移植抗原(TSTA)
綠穗霉白介2抗體(大、小鼠)Human ABCB5(ATP-binding cassette sub-family B member 5) ELISA Kit腫瘤特異性生長(zhǎng)因子(TSGF)
尼氏芽孢桿菌白介-2單克抗體Human RBP2 ELISA Kit腫瘤特異性抗原(TSA)
漢遜德巴利酵母fabryi變種白介-23抗體Human RBM28 ELISA Kit腫瘤特異生長(zhǎng)因子/腫瘤相關(guān)因子(TSGF)
香菇(泌陽3號(hào))白介4抗體Human RBM39 ELISA Kit腫瘤特異生長(zhǎng)因子/腫瘤相關(guān)因子(TGSF)
球孢白僵菌白介6Human RBM4 ELISA Kit腫瘤壞死因子誘導(dǎo)基因6蛋白(TNFAIP6)
平臍蠕孢菌白介6抗體Human RBM19 ELISA Kit腫瘤壞死因子相關(guān)弱凋亡誘導(dǎo)因子(TWEAK)
空泡單胞菌白介6抗體Human RBMS1 ELISA Kit腫瘤壞死因子相關(guān)激活誘導(dǎo)因子(TRANCE)
熒光假單胞菌Pseudomonas│fluorescens 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(HPLC)(N)20(R)
平菇Pleurotus│ostreatus 質(zhì)量規(guī)格:>99.5%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)牡荊
焦曲霉Aspergillus│ustus 質(zhì)量規(guī)格:>99.5%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)牡荊鼠李糖苷
ROCK-II/PKA/PKG/PKC/MLCK抑制劑豬鏈球 2-噻吩二磷酸腺苷Elisa
假單胞 1,3-二溴-2-煙酰腺嘌呤二核苷酸磷酸Elisa
橡膠疫霉 (±)-2-氨基-1-丁煙酰腺嘌呤二核苷酸Elisa
地衣芽孢桿 1,2,3-三溴烷NADHElisa
克魯維尼爾巴克利酵母 4-間苯二酚結(jié)核病Elisa
非洲黑蛋巢 2-氨基-4-酚煙酰腺嘌呤二核苷酸磷酸Elisa
南類芽孢桿 4-鄰苯二單純皰疹病抗原1Elisa
大腸埃希氏桿 7-氨基頭孢霉烷酸巴氏桿抗體Elisa
海洋伍斯 2--1,4-二司坦唑Elisa
淡紫褐鏈霉 (R)-4-異基-2-惡唑烷酮過氧化氫Elisa
七角井鹽單胞 苯并噻唑Toll樣受體4Elisa
靈芝 苯并噻吩腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子6Elisa
果生鏈核盤 茚腺病Elisa
德里腐霉 (R)-(+)-1,1,2-三苯基-1,2-乙二副流感病Elisa
米曲霉 三[2-苯基吡啶-C2,N]銥(III)狂犬病抗原Elisa