商品介紹:
INT-767是一種有效的FXR和TGR5激動劑(平均EC50為30nM和630nM)。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:1000403-03-1 純度:98.0% 分子量:494.66 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時,加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細(xì)胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
大腸埃希氏桿菌鋅指蛋白198抗體Anti-NCR1 Antibody凝血因子Ⅻ(F12)
蠟樣芽孢桿菌鋅指蛋白323抗體Anti-NDC80 Antibody凝血因子Ⅺ(F11)
棱柱散尾菌中華變型鋅指蛋白206抗體Anti-NCX1(SLC8A1) Antibody凝血因子ⅩⅢB肽(F13B)
植物乳桿菌緊密粘連蛋白ZO-3抗體Anti-NCSTN Antibody凝血因子ⅩⅢA1肽(F13A1)
*美味牛肝菌鋅指蛋白ZBT10抗體Anti-NDP52/CALCOCO2 Antibody凝血因子ⅩⅢ(F13)
枯草芽孢桿菌鋅指蛋白BED抗體Anti-NDRG1 Antibody凝血因子Ⅹ(F10)
產(chǎn)朊假絲酵母鋅指蛋白217抗體Anti-NDRG2 Antibody凝血因子Ⅸ(F9)
水棲黃桿菌鋅指蛋白575抗體Anti-NDRG3 Antibody凝血因子Ⅷ(F8)
直絲紫鏈霉菌鋅指蛋白X染色體蛋白抗體Anti-NDRG1 Antibody凝血因子Ⅶ(F7)
脂肪桿菌抑制蛋白4抗體Anti-NDRG2 Antibody凝血因子Ⅵ(F6)
季也蒙假絲酵母果生變種透明帶黏附蛋白ZAN抗體Anti-NDUFB2 Antibody凝血因子Ⅴ(F5)
西弗冠孢酵母鋅指蛋白437抗體Anti-NDUFB5 Antibody凝血因子Ⅱ(F2)
德氏乳桿菌鋅指蛋白415抗體Anti-NECTIN3 Antibody凝血/抗凝血復(fù)合體(TAT)
小單孢菌鋅指蛋白46抗體Anti-NDUFA1 Antibody凝集樣氧化低密度脂蛋白受體1(LOX1)
鼠李糖乳桿菌鋅指蛋白93抗體Anti-NECTIN2 Antibody檸檬合(CS)
嗜乙酰乙棒桿菌鋅指蛋白568抗體Anti-NECTIN4 Antibody檸檬(Citrin)
泛特異性蛋白Otubain2抗體中間普氏菌(不提供)人支氣管成纖維細(xì)胞提取物
卵巢癌相關(guān)基因1抗體綠葉假單胞菌人支氣管上皮細(xì)胞提取物
氧化應(yīng)激誘導(dǎo)生長抑制因子1抗體紫芝(紫靈芝,中華靈芝)人肺大靜脈內(nèi)皮細(xì)胞提取物
結(jié)腸癌過度表達(dá)蛋白1抗體變色栓菌(云芝)(斜面)人肺動脈成纖維細(xì)胞提取物
FXR和TGR5激動劑(INT-767)紫杉薄孔 二苯烷肉堿棕櫚?;D(zhuǎn)移1αElisa
擬青霉 季戊四腺苷酸環(huán)化Elisa
擬莖點霉 四氫糠轉(zhuǎn)甲狀腺蛋白Elisa
鴨疫里氏桿 松節(jié)油透胰凝乳蛋白Elisa
白被黑蛋巢 1-辛膠原吡啶交聯(lián)Elisa
球毛殼 正庚雙酚AElisa
枯草芽孢桿 環(huán)己白三烯B4Elisa
平菇 十六葉黃Elisa
鐮刀 十八胡蘿卜Elisa
蘇云金芽孢桿肯尼亞亞種 2-壬二酰Elisa
黑曲霉 1-壬胰凝乳蛋白Elisa
鏈格孢 苯甲游離轉(zhuǎn)甲狀腺蛋白Elisa
波羅的海西瓦氏 3-苯肉堿脂酰轉(zhuǎn)移Elisa
米曲霉 2-苯乙色P450 19A1BElisa
*匍枝根霉 2,4,6-基吡啶S轉(zhuǎn)移Elisa