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詳細(xì)介紹
商品介紹：
熒光染料PKH67 是一種可對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行熒光標(biāo)記的新型染料，可以標(biāo)記活體細(xì)胞，通過與膜結(jié)構(gòu)的脂質(zhì)分子結(jié)合而標(biāo)記細(xì)胞。 PKH67對(duì)細(xì)胞毒性較小，熒光背景低，脂溶性高，能夠輕易穿透細(xì)胞膜，有著強(qiáng)而穩(wěn)定的綠色熒光。經(jīng)PKH67標(biāo)記的細(xì)胞可用于體外和體內(nèi)增殖研究，且具有不會(huì)使鄰近細(xì)胞染色的功能。 在細(xì)胞分裂增殖過程中，PKH67 的熒光強(qiáng)度會(huì)隨著細(xì)胞的分裂而逐級(jí)遞減，標(biāo)記熒光可平均分配至兩個(gè)子代細(xì)胞中，因此其熒光強(qiáng)度是親代細(xì)胞的一半，根據(jù)這一特性，它可被用于檢測(cè)細(xì)胞增殖，細(xì)胞周期的估算及細(xì)胞分裂等方面。PKH67標(biāo)記細(xì)胞的熒光非常均一，并且分裂后的子代細(xì)胞的熒光分配也更均一。在細(xì)胞分裂增殖過程中，PKH67標(biāo)記熒光可平均分配至兩個(gè)子代細(xì)胞中，熒光強(qiáng)度變?yōu)橛H代細(xì)胞的一半，通過流式細(xì)胞儀根據(jù)熒光強(qiáng)度的不同，可檢測(cè)出未分裂細(xì)胞，分裂一次(1/2 的熒光強(qiáng)度)，二次(1/4 的熒光強(qiáng)度)，三次(1/8 的熒光強(qiáng)度)，以及更多分裂次數(shù)的細(xì)胞。PKH67 可檢測(cè)分裂次數(shù)多達(dá)六次甚至更多。 除了用于細(xì)胞增殖檢測(cè)，PKH67 還可以用于細(xì)胞的體外盒體內(nèi)示蹤，標(biāo)記后熒光在胞內(nèi)表達(dá)穩(wěn)定，陽(yáng)性標(biāo)記率達(dá)98%以上，標(biāo)記細(xì)胞形態(tài)良好，能有效地觀察細(xì)胞在體外的誘導(dǎo)分化情況；或?qū)?biāo)記的細(xì)胞注入體內(nèi)，可以有效的顯示移植細(xì)胞在活體組織中的遷移及分化。 PKH67標(biāo)記的細(xì)胞用于體內(nèi)觀察可以長(zhǎng)達(dá)數(shù)周之久，它常被用來做活體細(xì)胞檢測(cè)實(shí)驗(yàn)和用熒光電鏡觀察細(xì)胞長(zhǎng)期活動(dòng)的實(shí)驗(yàn)。PKH67 毒性較小，不影響細(xì)胞的增殖能力。此方法操作簡(jiǎn)單，且不用放射性同位素，不存在安全隱患。可以更快速，更準(zhǔn)確和更安全地得到想要的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。 PKH67標(biāo)記細(xì)胞后通常用流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞增殖檢測(cè)。 PKH67標(biāo)記細(xì)胞呈綠色熒光，熒光波長(zhǎng)：λex=490 nm,λem=502 nm。 儲(chǔ)存條件：-20℃避光保存。 |
產(chǎn)品屬性：
中文名稱：細(xì)胞膜染色試劑盒(PKH67)
英文名稱：
產(chǎn)品規(guī)格：500T
發(fā)貨周期：1～3天
公司產(chǎn)品僅用于科研
細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面：
細(xì)胞生物學(xué)的研究?jī)?nèi)容十分廣泛,主要包括：
①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究；
②生物膜與細(xì)胞器的研究；
③細(xì)胞骨架體系的研究；
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控；
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控；
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡)；
⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化；
⑧細(xì)胞工程.
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
羅漢果皂苷Ive(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： Dimethyl sulfoxide磷化GATA結(jié)合蛋白4抗體包裝1g
羅漢果皂苷V(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： Ethylene glycolGATA結(jié)合蛋白6抗體包裝25g
羅漢果皂苷ⅡA2英文名稱： Glycerol in water for HPLC verificationGLP-1單克抗體包裝5g
羅漢果皂苷ⅢA1英文名稱： Lithium carbonate顆粒B抗體包裝25g
羅漢果皂苷Ⅲe英文名稱： Neocuproine hydrochloride monohydrateG蛋白偶聯(lián)受體30抗體包裝5g
羅漢松樹脂酚-4'-O-β-龍膽二糖苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： Potassium bromide神經(jīng)節(jié)苷脂誘導(dǎo)分化相關(guān)蛋白2抗體包裝100g
羅通定/左旋延胡索乙/左旋四氫巴馬汀(標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Arsenazo I Hydrate3-磷甘油脫氫包裝25g
蘿卜硫；萊菔硫烷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： Sodium sulfate anhydrousGDNF家族受體α-1抗體包裝5g
裸花紫珠（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Dimethyl sulfone運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元存活蛋白結(jié)合蛋白1抗體包裝1g
絡(luò)塞定（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： 1,3-Propanediol葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1抗體包裝100mg
絡(luò)塞琳（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： DHA葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2抗體包裝10mg
絡(luò)塞維（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Dimetridazole磷化糖皮質(zhì)激受體抗體包裝100g
絡(luò)石苷（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Penicillin V potassium saltG蛋白偶聯(lián)受體GPR158蛋白抗體包裝1g
絡(luò)石藤（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： 2-NP-AOZγ連環(huán)蛋白/Catenin γ /γ鏈接抗體包裝5g
絡(luò)緦（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： SulfacetamideG1基丁A型受體相似蛋白2抗體包裝1g
海假交替單胞菌Pseudoalteromonas│marina 質(zhì)量規(guī)格：purity>99.5%,EP6,BR前顆粒蛋白試劑盒貓眼草黃;Chrysospleneti
鏈單孢菌屬菌種Streptomonospora│sp. 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品前膠原C內(nèi)肽增強(qiáng)子1試劑盒木栓;Friedelin
熱帶假絲酵母Candida│tropicalis 質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,BR前膠原C端肽試劑盒白綿馬AP;Albaspidin AP
細(xì)胞膜染色試劑盒(PKH67)伴放線團(tuán)聚桿 4-氯-3-三氟甲氧基苯甲心肌肌鈣蛋白CElisa
枯草芽孢桿 4-氯-3-三氟甲氧前列腺癌抗原3Elisa
膠孢 3--4-α-甲酰基消旋Elisa
堿湖迪茨氏 3-外雙環(huán)氨基[2.2.1]庚烷-2-外羧基酸晶狀體上皮源性生長(zhǎng)因子Elisa
雜色曲霉 3-內(nèi)雙環(huán)氨基[2.2.1]-5-嗯-2-內(nèi)羧基酸前列腺特異性膜抗原Elisa
異配囊接霉 乙酰乙酰芐（AABA）氨肽NElisa
枯草芽孢桿 2-乙基丁酸脂酰Elisa
栗酒裂殖酵母 1-萘甲酰氯精氨酸脫亞氨Elisa
細(xì)鏈格孢 2,5-二氟-4-甲氧基苯甲粘蛋白4Elisa
柑橘青霉 1-[2-(trifluoromethyl)phenyl]propan-1-ol粘蛋白20Elisa
光帽鱗傘 3,5-二甲氧基芐溴粘蛋白16Elisa
肉桂球形孢囊 L-酪氨鹽酸鹽表皮生長(zhǎng)因子樣蛋白6抗體Elisa
短小芽孢桿 3-溴-4,5-二氟苯唾液酸結(jié)合Ig樣凝集7Elisa
大腸桿 4′-羥基-2′-乙酮森林腦炎IGG抗體Elisa
巨獸芽孢桿 [4-(tert-butylcarbamoyl)-3-fluoro-phenyl]boronic a森林腦炎IGM抗體Elisa
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