以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
KDM5抑制劑(CPI-455) | CPI-455 | 1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg | 1~3天 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
CPI-455是一種有效的特異性KDM5抑制劑。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:1628208-23-0 純度:98.0% 分子量:278.31 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時,加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
球孢枝孢人C型鈉尿肽Anti-PDRG1 Antibody人多形核白彈性蛋白(PMN Elastase)
Sphingobium大鼠氧化低密度脂蛋白抗體Anti-PDXDC1 Antibody人多形核白彈性蛋白(PMN Elastase)
少根根霉人阿立新AAnti-PEAK1 Antibody人尿激型纖溶原激活物(uPA/PLAU)
Bacillus safensis小鼠色上皮衍生因子Anti-PECAM1 Antibody人尿激型纖溶原激活物(uPA/PLAU)
德假單胞菌大鼠抗平滑肌抗體Anti-PDZD2 Antibody人激肽釋放8(KLK 8)
托姆青霉大鼠核因子κB亞基p65親和肽Anti-PEG3 Antibody人激肽釋放8(KLK 8)
癬囊腔菌小鼠解整合樣金屬蛋白8Anti-PER3 Antibody人激肽釋放6(KLK 6)
蘇云金桿菌武漢亞種人神經(jīng)肽YAnti-Pepsin A Antibody人激肽釋放6(KLK 6)
臭曲霉蒼白變種小鼠抗Anti-Peripherin 1 Antibody人果糖1,6二磷縮(FDA)
黃柄曲霉人腦腸肽Anti-PEX10 Antibody人果糖1,6二磷縮(FDA)
鴨疫里氏桿菌大鼠纖溶抑制因子/凝血激活的纖溶抑制物Anti-PEX11B Antibody人組織蛋白D(cath-D)
黏液桿菌人乙酰Anti-PEX11G Antibody人組織蛋白D(cath-D)
網(wǎng)狀鐮孢大鼠血小板膜糖蛋白ⅡbⅢaAnti-PEX19 Antibody人激敏感性脂肪(HSL)
可可乳桿菌小鼠胰島抗體Anti-PEX14 Antibody人激敏感性脂肪(HSL)
大腸埃希氏菌大鼠血小板反應(yīng)蛋白/凝血敏感蛋白1Anti-PEX14 Antibody人胰激肽原(PK)
藤黃微球菌人腦鈉/腦鈉尿肽Anti-PEX2 Antibody人胰激肽原(PK)
磷化血管生成受體2抗體*粗柄白蘑C3H小鼠骨肉瘤細(xì)胞
轉(zhuǎn)錄因子TBX6抗體澳型核果褐腐病菌正常腎臟上皮細(xì)胞
分子伴侶復(fù)合體TCP-1α抗體頭孢霉屬小鼠的棕色脂肪腫瘤細(xì)胞
睪丸特異激2抗體白齒菌波西肉瘤細(xì)胞
KDM5抑制劑(CPI-455)球形芽孢桿 2,4-二羥基
多食鞘氨桿 4--3,5-二甲酸
豬丹絲 4-
糞腸球 3-
阿維丁鏈霉 2-
枯草芽孢桿 4-甲酸
總狀橫梗霉 3-甲酸
球孢白僵 2-甲酸
早期鏈霉 對甲
三葉草根瘤 間甲
嗜熱鏈球 鄰甲
拜耳接合酵母 間氨基
硬結(jié)節(jié)桿 酐
大豆炭疽病 苯亞磺酸鈉
纖細(xì)白僵 3-磺酸鈉