以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
商品介紹:
Z-LEHD-FMK是一種高效caspase-9的特異的和不可逆的小分子抑制劑??梢砸种朴蒀aspase 9激活導(dǎo)致的細(xì)胞凋亡。Z-LEHD-FMK是methyl(4S)-5-[[(2S)-1-[[(3S)-5-fluoro-1-methoxy-1,4-dioxopentan-3-yl]amino]-3-(1H-imidazol-5-yl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-4-[[(2S)-4-methyl-2-(phenylmethoxycarbonylamino)pentanoyl]amino]-5-oxopentanoate,即C32H43FN6O10,分子量為690.72。 Z-LEHD-FMK采用進(jìn)口高品質(zhì)原料分裝配制,濃度為1mM。本產(chǎn)品適用于需要用到Z-LEHD-FMK的各種實(shí)驗(yàn),請(qǐng)根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)行配制和使用,具體請(qǐng)參考相關(guān)文獻(xiàn)或?qū)嶒?yàn)指南。 儲(chǔ)存條件:-20℃保存。 有效期:一年。 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時(shí)內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
Carisoprodol(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Streptozocin柯薩奇病A16型聚合3D包裝25g
Carmustine(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Sulconazle Nitrate睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子抗體包裝5g
Carvedilol(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Sulconazle Nitrate角蛋白16抗體包裝1g
Chlormadinone Acetate(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Sunitinib base4號(hào)染色體開放閱讀框17抗體包裝25g
Ciclesonide(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Sunitinib base質(zhì)脆性X智力低下蛋白結(jié)合蛋白2抗體包裝100mg
Cilostazol(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Sunitinib Malate胸腺基質(zhì)淋巴生成受體抗體包裝25mg
Citalopram HBr(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Sunitinib Malate角蛋白12抗體包裝100g
Corticosterone(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Suprofen谷半胱γ合成抗體包裝25g
Cortisone acetate(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Tacrolimus /FK506 monohydrate表面趨化因子受體3抗體包裝500g
Cortisone(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Tacrolimus /FK506 monohydrate補(bǔ)體C2抗體包裝25g
Cyclophosphamide(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Tamoxifen Citrate 造血干抗原CD133抗體包裝1g
Cyclosporin A(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Tamoxifen Citrate 內(nèi)受體抗體包裝5g
Cyproterone acetate(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: TandutinibCD20抗體包裝1g
Cytarabine(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: TandutinibCD24抗體包裝1g
D(+)-阿拉伯糖(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Teicoplanin 白介2受體a鏈/IL-2RA抗體包裝250mg
易變?nèi)墙湍?/span>Trigonopsis│variabilis 質(zhì)量規(guī)格:>97%,BR血吸蟲抗原關(guān)附;Guan-fu base A
大腸埃希菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR,用于培養(yǎng),藥劑造模血吸蟲抗體試劑盒旋復(fù)花內(nèi)酯;Britannilacton
赤桿菌Erythrobacter│sp. 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品血吸蟲抗體試劑盒8-香葉草氧基補(bǔ)骨脂;8-Gerany
Caspase 9抑制劑大腸埃希 [(苯硫基)亞甲基]雙(三環(huán)己基膦)二氯化釕衣原體IgM抗體Elisa
Deinococcus 2,4-二氯-5-氟苯甲支原體IgM抗體Elisa
哈茨木霉 2-基-4-甲氧基苯甲細(xì)粒棘球絳蟲糞抗原Elisa
淡紫擬青霉 6-氨基-1-甲酸叔丁酯抗狂犬病抗體Elisa
鐮刀 1-BOC-6-氨基引唑乙酰Elisa
發(fā)酵乳桿 5-溴-3-氯吡-2-共濟(jì)失調(diào)蛋白3Elisa
球毛殼 3,4,5-三氯溴苯異連蛋白結(jié)合蛋白1Elisa
乳桿屬 鹽酸羥N-乙酰--D-氨基葡萄糖苷Elisa
黃色籃狀 3-溴苯酮白蛋白加合物Elisa
果生鏈核盤 1-苯基辛烷異常凝血原Elisa
浸麻類芽胞桿 4-叔丁基-2-氯苯乙酮D蛋白Elisa
草酸青霉 6-溴-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑羧肽Elisa
黃曲霉 5-甲氧基啉抗抗體Elisa
釀酒酵母 2,6-吡啶二羧酸單乙酯脯氨酸羥化1Elisa
腸桿 2-甲巰基-4-氨基嘧啶脯氨酸羥化2Elisa