以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
英文名稱:Cisplatin 產(chǎn)品規(guī)格:50mg Cisplatin 是一種無機(jī)的水溶性的鉑配合物,通過形成DNA 交聯(lián)劑抑制DNA 合成。 Cisplatin 通過與DNA 相互作用形成DNA 交聯(lián)劑誘導(dǎo)細(xì)胞毒性,激活多條信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路, 包括Erk, p53, p73, 和MAPK,其中對(duì)激活凋亡影響大。Cisplatin (30 mM)處理HeLa 細(xì)胞6小時(shí),顯著激活Erk,持續(xù)到隨后的14個(gè)小時(shí)期間。Cisplatin 還具有有效的抗腫瘤活性,誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞死亡。Cisplatin 可引起腎小管上皮細(xì)胞(RPTC)發(fā)生細(xì)胞凋亡,引起細(xì)胞收縮,使caspase 3活性提高50倍,磷脂酰絲氨酸外翻提高4倍,染色質(zhì)凝集和DNA 倍性分別提高5 和15倍。Cisplatin (800 μM)處理RPTC 4個(gè)小時(shí),產(chǎn)生細(xì)胞壞死的典型特征。 別名:cisplatinum, CDDP, Platinol and Platinol-AQ CAS:15663-27-1 分子式:Cl2H6N2Pt 分子量:300.05 儲(chǔ)存:-20℃,有效期36個(gè)月 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長(zhǎng)或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
匍枝根霉原變種NK表面抑制性受體CD94抗體Human CKAP4 ELISA Kit山羊血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)免疫試劑盒
白僵菌淋巴功能相關(guān)抗原-3抗體Human CKS2 ELISA Kit山羊血管緊張轉(zhuǎn)化(ACE)免疫試劑盒
香菇—五香1號(hào)皮膚T虜獲趨化因子抗體Human Claudin 23 ELISA Kit山羊血管緊張Ⅱ(ANG-Ⅱ)免疫試劑盒
釀酒酵母補(bǔ)體C3a過敏抗體Human CREB1 ELISA Kit山羊血管緊張Ⅰ(ANG-Ⅰ)免疫試劑盒
猴假單胞菌巨噬炎癥蛋白-1γ抗體Human CREB3L2 ELISA Kit山羊褪黑(MT)免疫試劑盒
奇異球菌神經(jīng)粘附分子配體1抗體Human CREST ELISA Kit山羊銅藍(lán)蛋白(CP)免疫試劑盒
盤孢菌8號(hào)染色體開放閱讀框30a抗體Human CRMP1 ELISA Kit山羊瘦(LEP)免疫試劑盒
釀酒酵母色P450 11A1抗體Human Claudin 7 ELISA Kit山羊生長(zhǎng)激釋放多肽(GHRP)免疫試劑盒
鍺栓孔菌肉堿棕櫚?;D(zhuǎn)移1A抗體Human CLEC10A/CD301 ELISA Kit山羊生長(zhǎng)激(GH)免疫試劑盒
芽胞桿菌分化周期CDC42蛋白抗體Human CPOX(Coproporphyrinogen oxidase) ELISA Kit山羊狀腺原(T3)免疫試劑盒
中國(guó)臺(tái)灣根霉磷化分化周期CDC42蛋白抗體Human CIN85 ELISA Kit山羊熱休克蛋白70(HSP-70)免疫試劑盒
蘋果落葉交鏈孢霉環(huán)化相關(guān)蛋白CAP-2抗體Human CREB1 ELISA Kit山羊固(ALD)免疫試劑盒
假單胞菌屬階段特異性胚胎表面抗原-1抗體Human CKAP4 ELISA Kit山羊前列腺內(nèi)過氧化物合1(前列腺G / H合和環(huán)氧合)(PTGS1)免疫試劑盒
硬結(jié)節(jié)桿菌20號(hào)染色體開放閱讀框202抗體Human CKS2 ELISA Kit山羊前列腺G/H合2(PTGS2)免疫試劑盒
根瘤菌粘膜相關(guān)上皮趨化因子28抗體Human Cortactin ELISA Kit山羊前列腺E2(PGE2)免疫試劑盒
梨形毛霉癌胚抗原單克抗體(包被)Human Claudin 23 ELISA Kit山羊皮質(zhì)(Cortisol)免疫試劑盒
熱帶假絲酵母Candida│tropicalis 質(zhì)量規(guī)格:>95%,BRQ熱科克斯體1試劑盒輪環(huán)藤堿
刺囊殼Ascotricha│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>50%,BSP選擇試劑盒羅紅霉
匍枝根霉(黑根霉)Rhizopus│stolonifer 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRP物質(zhì)受體試劑盒雷公藤吉堿
Cisplatin (DNA交聯(lián)劑/細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)劑)泡盛曲霉 辛可尼定可溶性P選擇Elisa
南游動(dòng)球 氫化奎尼定 1,4-(2,3-二氮雜萘)二可溶性凋亡相關(guān)因子Elisa
大腸埃希氏 氫化奎寧 1,4-(2,3-二氮雜萘)二可溶性凋亡相關(guān)因子配體Elisa
香菇 L-(-)-二(對(duì)甲酰)可溶性凝集樣氧化低密度脂蛋白受體1Elisa
克魯斯假絲酵母 二苯甲?;?L-,無水可溶性髓系觸發(fā)受體-1Elisa
彎曲假單胞 (-)-乙酸二氫香芹酯可溶性髓系觸發(fā)受體-2Elisa
釀酒酵母 醋酸去氫表雄酮可溶性晚期糖基化終末產(chǎn)物受體Elisa
弓形蟲(QHO株) 乙酸柏木酯可溶性間粘附分子1Elisa
酮丁梭 (1S)-(-)-樟腦烷酸可溶性血管內(nèi)皮粘附分子1Elisa
發(fā)酵假絲酵母 膽固硬脂酸酯可溶性血小板內(nèi)皮粘附分子1Elisa
釀酒酵母 膽固油酸酯可溶性腫瘤壞死因子受體2Elisa
葉生布勒擔(dān)子酵母 膽固油酸酯可溶性轉(zhuǎn)鐵蛋白受體Elisa
大腸埃希氏桿 膽固酯可替寧Elisa
圓錐曲霉 乙酸(1S,2R)-2-[N-芐基-N-(苯基磺酰)氨基]-1-苯基酯[交叉反應(yīng)用試劑]喹啉酸Elisa
單胞屬 (R)-(+)-2-氨基-2'-羥基-1,1'-聯(lián)萘酪氨酸激AElisa