以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
中文名稱(chēng) | 英文名稱(chēng) | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
AMPK激活劑(Ampkinone) | Ampkinone | 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg | 1~3天 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
Ampkinone是AMPK小分子激活劑,通過(guò)Thr172的磷酸化激活A(yù)MPK活性,增強(qiáng)葡萄糖的吸收,EC50值4.3uM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):1233082-79-5 純度:98.11% 分子式:C??H??NO? 分子量:505.52 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門(mén)的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
中慢生華癸根瘤菌γ-微管蛋白GCP6抗體Human TMCC1 ELISA Kit大鼠尿微量白蛋白(MAU/ALB)免疫試劑盒
黃桿菌β-葡萄糖苷1抗體Human TMC1 ELISA Kit大鼠尿相關(guān)蛋白C(UreC)免疫試劑盒
黑木耳甘裂解系統(tǒng)H蛋白抗體Human TMCC2 ELISA Kit大鼠尿激型纖溶原激活物受體(PLAUR/uPAR)免疫試劑盒
大孢枝孢菌15號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框58抗體Human TMCO6 ELISA Kit大鼠尿激型纖溶原激活物(uPA)免疫試劑盒
大羽須瑚菌淀粉結(jié)合域蛋白1抗體Human TMED3 ELISA Kit大鼠尿激(UK)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌延伸因子G1抗體Human TMED2 ELISA Kit大鼠尿苷二磷葡萄糖轉(zhuǎn)移2(UGT2)免疫試劑盒
大腸埃希菌β葡萄糖苷2抗體Human TMEM199 ELISA Kit大鼠尿苷二磷葡萄糖轉(zhuǎn)移1(UGT1)免疫試劑盒
冬蟲(chóng)夏草β葡萄糖苷3抗體Human TMED4 ELISA Kit大鼠鳥(niǎo)酰轉(zhuǎn)移(OCT)免疫試劑盒
芽孢桿菌屬膠質(zhì)母瘤相關(guān)蛋白GBAS抗體Human TMEM201 ELISA Kit大鼠黏著斑蛋白(VCL)免疫試劑盒
褐囊蜜環(huán)菌紅糖苷α1抗體Human TMEM213 ELISA Kit大鼠黏多糖/糖聚糖免疫試劑盒
鮮綠青霉G蛋白結(jié)合蛋白1抗體Human TMEM208 ELISA Kit大鼠腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(BDNF)免疫試劑盒
黃褐色牛桿菌G蛋白結(jié)合蛋白4抗體Human TMEM214 ELISA Kit大鼠腦鈉/腦鈉尿肽(BNP)免疫試劑盒
大豆慢生根瘤菌G蛋白結(jié)合蛋白6體Human TMEM231 ELISA Kit大鼠腦紅蛋白(NGB)免疫試劑盒
Pseudoclavibacter caeni Srinivasan鳥(niǎo)苷環(huán)化激活蛋白1抗體Human PMCH(Pro-MCH) ELISA Kit大鼠腦啡肽(ENK)免疫試劑盒
異常漢遜酵母鳥(niǎo)苷環(huán)化激活蛋白2抗體Human TMEM25 ELISA Kit大鼠腦腸肽(BGP/Gehrelin)免疫試劑盒
粟酒裂殖酵母鳥(niǎo)苷環(huán)化激活蛋白3抗體Human TMEM27 ELISA Kit大鼠內(nèi)脂(visfatin)免疫試劑盒
放射形根瘤菌Rhizobium│radiobacter 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品桑皮苷A
芽孢桿菌屬Bacillus│sp. 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品桑辛
: 44605資源名稱(chēng): 分枝桿菌 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,用于高通量質(zhì)譜,99.9995%丹參酚B酯
AMPK激活劑(Ampkinone)大黃(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): Barium sulfate纖維母生長(zhǎng)因子5抗體包裝1g
大黃-8-β-D-吡喃葡萄糖苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): Benzenesulfonic acid脆性X綜合征相關(guān)蛋白AFF1抗體包裝25g
大黃(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): Benzoin感覺(jué)神經(jīng)蛋白1抗體包裝5g
大黃英文名稱(chēng): Benzophenone hydrazone線粒體型共濟(jì)失調(diào)蛋白抗體包裝1g
大黃(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): Bismuth (III) chlorideFC段IgE受體α多肽抗體包裝1g
大戟因子L1(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): Bismuth (III) citrateFAM81A蛋白抗體包裝250mg
大薊(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): Bismuth (III) potassium iodideFAM78B蛋白抗體包裝25g
大薊苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): Bismuth (III) sulfate9號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框59抗體包裝5g
大麥芽堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): Bismuth(III) subcarbonate basicFAM76A蛋白抗體包裝100g
大青葉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): Bismuth(III) subsalicylateFAM76B蛋白抗體包裝1g
大蒜,二烯基二硫英文名稱(chēng): Bismuth, granularFAM92A1蛋白抗體包裝1g
大血藤(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): BNOA-Na, β--Naphthoxyacetic acid sodium saltFAM98A蛋白抗體包裝5g
大葉骨碎樸(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): Brij 56FRMD5蛋白抗體包裝25g
大葉茜草英文名稱(chēng): Bromochlorophenol blue sodium saltFRMD6蛋白抗體包裝5g
大葉茜草英文名稱(chēng): Bromophenol blue, sodium saltFAM161A蛋白抗體包裝25g