以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
英文名稱:RepSox 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg RepSox是一種有效的選擇性的TGFβR-1/ALK5抑制劑,抑制ALK5自磷酸化,IC50為4nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):446859-33-2 別名:E-616452;SJN 2511 純度:99.94% 分子量:287.32 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
北京芽孢桿菌葡萄糖氧化抗體Human TIP47 ELISA Kit大鼠流行性出血熱IgG抗體免疫試劑盒
米曲霉葡萄糖苷2β/Glucosidase IIβ抗體Human TIMM13 ELISA Kit大鼠磷脂酰肌抗體IgG/IgM(PI Ab-IgG/IgM)免疫試劑盒
類諾卡氏菌谷脫氫2抗體Human TIP30 ELISA Kit大鼠磷脂A2(PL-A2)免疫試劑盒
蠅鵝膏菌磷化谷受體1抗體Human TIPIN ELISA Kit大鼠磷烯式羧激(PCK)免疫試劑盒
泡囊短波單胞菌γ-谷酰水解抗體Human TIMM17A ELISA Kit大鼠磷激活谷酰(PAG)免疫試劑盒
大腸埃希氏菌谷酰-脯酰-tRNA合成抗體Human TIMM17B ELISA Kit大鼠磷肌3激(PI3K)免疫試劑盒
Pseudarthrobacter谷氧還蛋白2抗體Human FLNC(Filamin-C) ELISA Kit大鼠磷化乙酰羧化(pACCase)免疫試劑盒
弗雷德里克斯堡假單胞菌谷氧還蛋白5抗體Human TJAP1 ELISA Kit大鼠磷化胰島受體(pISR1)免疫試劑盒
大腸桿菌過氧化2抗體Human TIMM22 ELISA Kit大鼠磷化腺苷活化蛋白激(pAMPK)免疫試劑盒
康氏木霉過氧化7抗體Human THNSL2 ELISA Kit大鼠磷化外信號(hào)調(diào)節(jié)激(pERK)免疫試劑盒
蒼白鹽八疊球菌S轉(zhuǎn)移α1抗體Human TGM4 ELISA Kit大鼠磷化糖原合成激3(pGSK-3)免疫試劑盒
根瘤菌S轉(zhuǎn)移κ抗體Human TGIF2LX ELISA Kit大鼠磷化核因子-κB(p-NF-κB)免疫試劑盒
熒光假單胞菌半乳糖激1抗體Human THOC2 ELISA Kit大鼠磷化縫隙連接蛋白α1,43kDa(phosphorylated GJA1)免疫試劑盒
運(yùn)動(dòng)節(jié)桿菌糖原蛋白2抗體Human THOC1 ELISA Kit大鼠磷化蛋白激C(P-PKC)免疫試劑盒
釀酒酵母磷半乳糖尿苷轉(zhuǎn)移1抗體Human THEM2 ELISA Kit大鼠磷化蛋白激B(P-PKB)免疫試劑盒
皮狀絲孢酵母糖原蛋白1抗體Human SIRT5(NAD-dependent deacetylase sirtuin-5) ELISA Kit大鼠磷化Tau蛋白(pMAPT/pTAU)免疫試劑盒
小單孢菌Micromonospora│sp. 質(zhì)量規(guī)格:柱層析用,10-30目甘草查爾C
空腸彎曲桿菌Campylobacter│jejuni 質(zhì)量規(guī)格:for HPLC, ≥99%(T)甘草查爾B
檸檬假交替單胞菌Pseudoalteromonas│citrea 質(zhì)量規(guī)格:農(nóng)殘級(jí)甘草查爾A
TGFβR-1和ALK5抑制劑(RepSox)異常漢遜酵母 代三吡咯烷基鏻六氟磷酸鹽蛋氨酸合成Elisa
枯草芽孢桿 8-溴-2'-脫氧鳥苷3-羥酰脫氫Elisa
球形芽胞桿 5-氨基-2-并噻唑ATPElisa
多主葡萄殼 丁基三苯基化膦膜結(jié)合型前列腺E合成1Elisa
土曲霉 2-氨基-4-吡啶羧酸前列腺E合成1Elisa
伊氏利斯特氏 N,N-二基磺酰精氨基琥珀酸合成Elisa
白色球形孢囊 Boc-O-芐基-L-蘇氨精氨琥珀酸裂解Elisa
克魯弗酵母 堿式乙酸鉛半胱氨酰氨肽Elisa
東方伊薩酵母 堿式乙酸鉛鈣調(diào)磷酸Elisa
碳樣小單孢 Boc-Glutaminol天蠶BElisa
季也蒙邁耶氏酵母 堿式乙酸鉛谷氨酰Elisa
矩圓黑盤孢 Fmoc-Glu(OAll)-OH晶體蛋白αElisa
沙氏倚囊霉 2-(三氟甲基)苯硫酚晶體蛋白βElisa
可可豆醋桿 3-酸糖原Elisa
短小芽孢桿 酸鋅透明質(zhì)酸Elisa