商品介紹:
PF-04447943是一種有效的人重組PDE9A抑制劑,IC50為12nM,比作用于其他PDE家族成員選擇性高78倍(IC50>1000nM)。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):1082744-20-4 純度:99.77% 分子式:C??H??N?O? 分子量:395.46 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長(zhǎng)或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
綠色糖單孢菌外基質(zhì)磷化抗體Human HPSE(Heparanase) ELISA Kit尿游離皮質(zhì)(UFC)ELISA Kit
枯草芽孢桿菌肥大蛋白7抗體Human MRAS ELISA Kit尿微量白蛋白(MAU/ALB)ELISA Kit
白僵菌微管相關(guān)蛋白4抗體Human MRE11 ELISA Kit尿微量白蛋白(MAU)ELISA Kit
普通變形桿菌26S蛋白調(diào)節(jié)亞型7抗體Human MRI1 ELISA Kit尿微量白蛋白(ALB)ELISA Kit
蘇云金芽孢桿菌蠟螟亞種蛋白酪磷非受體型4抗體Human MRFAP1 ELISA Kit尿相關(guān)蛋白C(UreC)ELISA Kit
墳?zāi)构?jié)桿菌腦腸肽O?;D(zhuǎn)移抗體Human MRM1 ELISA Kit尿嘧啶核苷磷化1(UPP1)ELISA Kit
水生黃桿菌轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子MRG15抗體Human G6PD(Glucose-6-phosphate 1-dehydrogenase) ELISA Kit尿激型纖溶原激活因子(uPA)ELISA Kit
費(fèi)氏中華根瘤菌髓系/淋巴混合譜系白血病蛋白5抗體Human OPRM1(Mu-type opioid receptor) ELISA Kit尿激型纖溶原激活物受體(PLAUR/uPAR)ELISA Kit
長(zhǎng)雙歧桿菌T淋巴成熟相關(guān)蛋白抗體Human MPP3 ELISA Kit尿激型纖溶原激活物(uPA/PLAU)ELISA Kit
串珠鐮孢甲基二尿癥cblA抗體Human TLR9(Toll-like receptor 9) ELISA Kit尿激型纖溶原激活物(uPA)ELISA Kit
黃海鞘盒菌非平滑肌肌球蛋白2A抗體Human MPPE1 ELISA Kit尿激型纖溶原激活劑受體(uPAR)ELISA Kit
枯草芽胞桿菌枯草亞種DNA修復(fù)甲基磺敏感性基因19抗體Human MOGAT2 ELISA Kit尿激(UK)ELISA Kit
針葉樹散斑殼19號(hào)染色體開放閱讀框28抗體Human MOGAT1 ELISA Kit尿肌酐(UCR)ELISA Kit
醬油曲霉珠蛋白1抗體Human MOK ELISA Kit尿苷二磷葡萄糖神經(jīng)酰葡萄糖基轉(zhuǎn)移(UGCG)ELISA Kit
露濕漆斑菌肌紅蛋白抗體Human MPPED1 ELISA Kit尿苷二磷葡萄糖轉(zhuǎn)移2(UGT2)ELISA Kit
節(jié)桿菌錯(cuò)配修復(fù)蛋白6抗體Human MPPED2 ELISA Kit尿苷二磷葡萄糖轉(zhuǎn)移1(UGT1)ELISA Kit
黑根霉Rhizopus│niger 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR白果內(nèi)酯
長(zhǎng)枝木霉Trichoderma│longibrachiatum Rifai 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR銀杏內(nèi)酯C
根瘤菌Rhizobium│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR銀杏內(nèi)酯B
人重組PDE9A抑制劑(PF-04447943)EGF 表皮生長(zhǎng)因子抗體(大鼠)酯 ≥99%(GC)
EGFL7 類表皮生長(zhǎng)因子域7抗體酯 for HPLC, ≥99.5% (GC)
EGFR 表皮生長(zhǎng)因子受體抗體酯 無水級(jí), 99.5%
EF1 Alpha 延伸因子EF-1a抗體肉桂酯 99%
EGFRvIII 表皮生長(zhǎng)因子受體III型突變體抗體肉桂酯 ≥99%, FCC, Kosher, FG
Egr-1 早期生長(zhǎng)應(yīng)答蛋白1抗體酯 99%
eIF2 alpha 真核啟動(dòng)因子2α抗體酯 ≥99%, FCC
Phospho-eIF2 alpha (Ser51) 化真核啟動(dòng)因子2α抗體癸酯 Standard for GC ,≥99.5% (GC)