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詳細介紹
以下是細胞生物學(xué)試劑的詳細介紹：
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
50T|100T | 1～3天 |
商品介紹：
產(chǎn)品背景： 細胞凋亡是細胞的基本特征之一，它在機體的胚胎發(fā)育、組織修復(fù)、內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定和一些疾病發(fā)生過程等方面起著十分重要的作用。 在正常細胞中，磷脂酰絲氨酸(PS)只分布在細胞膜脂質(zhì)雙層的內(nèi)側(cè)，而在細胞凋亡早期，細胞膜中的磷脂酰絲氨酸(PS)由脂膜內(nèi)側(cè)翻向外側(cè)。在體內(nèi)，巨噬細胞可以識別翻轉(zhuǎn)到細胞膜表面的PS 從而將這些程序性死亡的細胞清除，因此凋亡過程中并不伴隨局部的炎癥反應(yīng)，而在細胞壞死的過程中則常常伴隨著炎癥反應(yīng)。 AnnexinⅤ是一種分子量為35-36kD的Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白，能與細胞凋亡過程中翻轉(zhuǎn)到膜外的PS 高親和力特異性結(jié)合。PS 外翻發(fā)生在細胞核破裂，DNA 片段化以及凋亡相關(guān)蛋白出現(xiàn)之前，這使得Annexin V 與PS的結(jié)合成為凋亡早期的一種重要檢測標(biāo)志事件。 檢測原理： 在正常的活細胞中，磷脂酰絲氨酸(phosphotidylserine，PS)位于細胞膜的內(nèi)側(cè)，但在早期凋亡的細胞中，PS 從細胞膜的內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到細胞膜的表面，暴露在細胞外環(huán)境中。 Annexin-Ⅴ能與PS 高親和力結(jié)合。可通過細胞外側(cè)暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細胞的胞膜結(jié)合。用標(biāo)記了APC的AnnexinⅤ作為熒光探針，利用流式細胞儀或熒光顯微鏡可檢測細胞凋亡的發(fā)生。細胞壞死的過程中也會發(fā)生細胞膜損傷，壞死的細胞會結(jié)合Annexin V-APC。 Annexin V-APC 通常與細胞膜非滲透性核酸熒光染料聯(lián)合使用以檢測凋亡細胞。常用的染料是PI。正常細胞和早期凋亡細胞的細胞膜是完整的，核酸染料PI 不能透過完整的細胞膜，但在凋亡中晚期的細胞和壞死細胞，PI 能夠透過細胞膜與細胞核結(jié)合呈現(xiàn)紅色。 PI/Annexin V-APC試劑盒將Annexin Ⅴ與PI匹配使用，可以將凋亡早期的細胞和晚期的細胞以及死細胞區(qū)分開來。壞死細胞可以同時與Annexin V-APC和PI 結(jié)合顯色，而PI 則被排除在活細胞(APC陰性)和早期凋亡細胞(APC陽性)之外。 Annexin V-APC 細胞凋亡檢測試劑盒可以方便快捷的檢測凋亡細胞，使用流式細胞儀、熒光顯微鏡或其它熒光檢測設(shè)備進行檢測。 儲存條件：染色液2-8℃避光保存；結(jié)合液2-8℃保存； |
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟：
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer（10×）稀釋成1×Binding buffer工作液備用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml無菌去離子水）。
2) 對于懸浮細胞，500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞，要用不含EDTA的胰酶消化細胞，胰酶消化時間不宜過長或過短，最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時，加入細胞培養(yǎng)液，將細胞輕輕吹打下來，轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后，加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌，離心收集細胞，共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重懸細胞，使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液（細胞總數(shù)為1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，輕輕混勻，室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測：
染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混勻后使用流式細胞儀檢測（1小時內(nèi)檢測）。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組，正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析，繪制雙色散點圖（two-color dot plot），F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo)，PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時，活細胞僅有很低強度的背景熒光，早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光，晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測：
染色孵育后涂片，顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞，細胞核顯示紅色，膜上有綠色光環(huán)。
依澤替米貝;依折麥布英文名稱： Meloxicam卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白51抗體包裝5g
右雷佐生；右亞英文名稱： Memantine HCl卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白125抗體包裝1g
右雷佐生鹽鹽;右亞鹽鹽英文名稱： Memantine hydrochloride卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白50抗體包裝5g
左西孟旦英文名稱： Methotrexate卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白90A抗體包裝100mg
左旋地平/磺左旋地平英文名稱： Methotrexate卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白71抗體包裝100mg
Diabetes Research英文名稱： Nimesulide卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白37抗體包裝1g
MSDC-0160英文名稱： Miconazole Nitrate卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白47抗體包裝5g
Phenformin hydrochloride英文名稱： Miconazole Nitrate卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白17抗體包裝1g
Sotagliflozin(LX4211)英文名稱： Micronomicin Sulfate卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白58抗體包裝25g
艾格列凈;依帕列凈;恩格列英文名稱： Micronomicin Sulfate卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白94抗體包裝5g
伏格列波糖英文名稱： 4-MUG卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白82抗體包裝1g
格列本脲英文名稱： MinoxidilCDK5激活結(jié)合蛋白2抗體包裝250mg
格列吡英文名稱： MinoxidilCDK2相互作用蛋白抗體包裝5g
格列喹英文名稱： Minoxidil Sulfate周期蛋白依賴性激14抗體包裝1g
格列美脲英文名稱： Minoxidil Sulfate癌胚抗原相關(guān)粘附分子19抗體包裝5g
: AS4.273資源名稱: 產(chǎn)色鏈霉菌 質(zhì)量規(guī)格：>99.0%血血小板衍生生長因子AB試劑盒銀杏內(nèi)酯B;Ginkgolide B
成團泛菌Pantoea│agglomerans 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品血小板因子3試劑盒異鉤藤堿;Isorhychophylli
: Bt0219資源名稱: 蘇云金芽胞桿菌 質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,BR血小板衍生生長因子CC試劑盒銀杏內(nèi)酯A;Ginkgolide A
Annexin V-APC/PI細胞凋亡檢測試劑盒副雞嗜血桿 4-溴甲基肉桂酸甲酯C1q腫瘤壞死因子相關(guān)蛋白6Elisa
蠟樣芽孢桿 2,3,4,5-四氟苯甲酰氯核轉(zhuǎn)錄因子p65Elisa
耐輻射奇球 3-甲氧基-4-(3-甲氧基氧基)苯甲二酰甘油 -O-?；D(zhuǎn)移同源物 2Elisa
阿拉華蠟孔 N-(2-氯芐基)-N-胞苷脫氨Elisa
金耳 2,6-二氟苯乙血管緊張Ⅱ受體2Elisa
釀酒酵母 1,4-環(huán)己二羧酸二甲酯(順反異構(gòu)體混合物)K-Ras抗體Elisa
苔原彎頸霉 沙格列汀一水合物生存抗體Elisa
葛氏沙雷氏 5-溴-3-氯-2-基吡啶nm23-H1抗體Elisa
膠紅酵母 胡椒酸鳥氨酸脫羧Elisa
嗜熱假諾卡氏 異戊酯酪氨酸蛋白激受體A5Elisa
大豆慢生根瘤 異戊酯蛋白質(zhì)賴氨酸甲基轉(zhuǎn)移Elisa
釀酒酵母 4-氯-2-氟三氟甲苯多藥耐藥基因Elisa
人蒼白桿 2-氯-4-氟三氟甲苯膜聯(lián)蛋白-A4Elisa
節(jié)桿 2,6-雙(三丁基錫基)二噻吩并[3,2-b:2',3'-d]噻吩膜聯(lián)蛋白-A7Elisa
紅細 4-氨基-L-苯氨酸胃蛋白Elisa
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