以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
商品介紹:
Kenpaullone是一種有效的CDK1/cyclin B和GSK-3β抑制劑,IC50值分別為0.4μM和23nM,同時(shí)可抑制CDK2/cyclin A,CDK2/cyclin E和CDK5/p25的活性,IC50值分別為0.68μM,7.5μM和0.85μM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):142273-20-9 別名:9-Bromopaullone;NSC-664704 純度:98.09% 分子量:327.18 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長(zhǎng)或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
黑曲霉PE標(biāo)記的兔抗長(zhǎng)爪沙鼠IgGAnti-YTHDF2 Antibody垂體腺苷環(huán)化激活肽受體(PACAPR)
貝倫格勒座腔菌梨?;?/span>APC標(biāo)記的兔抗長(zhǎng)爪沙鼠IgGAnti-XRCC6 Antibody(PB0524)垂體腺苷環(huán)化激活肽(ADCYAP1)
海南吉爾霉Alexa Fluor 350標(biāo)記的兔抗長(zhǎng)爪沙鼠IgGAnti-YBX1 Antibody穿孔1(PRF1)
pLCDH-ciRAlexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗長(zhǎng)爪沙鼠IgGAnti-XRCC6 Antibody觸珠蛋白相關(guān)蛋白(HPR)
甜芝(靈芝屬之一種)Alexa Fluor 555標(biāo)記的兔抗長(zhǎng)爪沙鼠IgGAnti-YAP1 Antibody成釉蛋白(AMBN)
谷棒桿菌Ⅲ型Alexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗長(zhǎng)爪沙鼠IgGAnti-YES1 Antibody成纖維生長(zhǎng)因子受體樣蛋白1(FGFRL1)
單胞菌辣根過氧化物標(biāo)記的兔抗長(zhǎng)爪沙鼠IgGAnti-YWHAE Antibody成纖維生長(zhǎng)因子受體4(FGFR4)
貝氏不動(dòng)桿菌辣根過氧化物標(biāo)記的兔抗水貂IgGAnti-ZAP70 Antibody成纖維生長(zhǎng)因子受體3(FGFR3)
劉志恒氏菌生物標(biāo)記的兔抗水貂IgGAnti-ZBTB16 Antibody成纖維生長(zhǎng)因子受體2(FGFR2)
青霉?fàn)钫持忝?/span>Cy3標(biāo)記的兔抗水貂IgGAnti-YWHAZ Antibody成纖維生長(zhǎng)因子受體1(FGFR1)
海芋平臍蠕孢Cy5標(biāo)記的兔抗水貂IgGAnti-ZBTB7A Antibody成纖維生長(zhǎng)因子7(FGF7)
豬丹絲菌Cy5.5標(biāo)記的兔抗水貂IgGAnti-ZBTB7A Antibody成纖維生長(zhǎng)因子5(FGF5)
PaenibacillusCy7標(biāo)記的兔抗水貂IgGAnti-ZEB2 Antibody成纖維生長(zhǎng)因子3(FGF3)
Acinetobacter pittii Nemec et al. PE標(biāo)記的兔抗水貂IgGAnti-ZFP42 Antibody成纖維生長(zhǎng)因子21(FGF21)
玫瑰單胞菌屬PE-Cy3標(biāo)記的兔抗水貂IgGAnti-ZEB1 Antibody成纖維生長(zhǎng)因子19(FGF19)
旋枝霉PE-CY5標(biāo)記的兔抗水貂IgGAnti-ZEB2 Antibody成纖維生長(zhǎng)因子18(FGF18)
內(nèi)皮細(xì)胞纖溶原激活抑制蛋白1抗體脫氮假單胞菌大鼠腸微血管組織提取物
前列腺癌和乳腺癌高表達(dá)蛋白抗體脫氮付球菌大鼠大隱靜脈組織提取物
前動(dòng)力蛋白2抗體桃色歐文氏菌大鼠主動(dòng)脈組織提取物
原鈣粘蛋白γB5抗體丁香假單胞菌大鼠血管組織提取物
CDK1/cyclin B和GSK-3β抑制劑壞損假尾孢 Rubianthraquinone
淺白隱球酵母 Pterisolic acid F
卵形巴貝斯蟲(靈寶株) Pterisolic acid C
土曲霉 Perilloxin
發(fā)光假蜜環(huán) Pepluanin A
類銀白紫絲膜 Paeonilactone C
芽孢桿 Onitin 2'-O-glucoside
銅綠假單胞 N-Methylnuciferine
Pt彩色豆馬勃6-4 Neorauflavene
韋斯特迪克氏曲霉 Neolinine
熱帶假絲酵母 N1-Methoxymethyl picrinine
副溶血弧 Melilotigenin C
大腸埃希氏 Melilotigenin B
果生鏈核盤 涼山香茶菜A
香菇 Laxiracemosin H