Wnt抑制劑(JW74)公司正在出售的產(chǎn)品：Phospho-FoxO1 (Ser256) /FITC 熒光標(biāo)記兔抗人、大、小鼠叉頭蛋白家族1抗體IgG2,5-二-2,5-己二 99%
FOXO3A/FITC 熒光標(biāo)記轉(zhuǎn)錄因子FOXO3A抗體IgG2,5-二-3-己炔-2,5-二 99%
Phospho-FoxO3a (Ser318/321) /FITC 熒光標(biāo)記兔抗人、大、小鼠叉頭蛋白3A抗

以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹：

商品介紹：

公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

操作步驟：

1. 樣品染色

1) 將Binding Buffer（10×）稀釋成1×Binding buffer工作液備用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml無(wú)菌去離子水）。

2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。

對(duì)于貼壁細(xì)胞，要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞，胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短，最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí)，加入細(xì)胞培養(yǎng)液，將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái)，轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。

3) 收集細(xì)胞后，加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌，離心收集細(xì)胞，共洗滌兩次。

4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重懸細(xì)胞，使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。

5) 吸取100μl細(xì)胞懸液（細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，輕輕混勻，室溫避光孵育15min。

2. 樣品檢測(cè)

1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè)：

染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)（1小時(shí)內(nèi)檢測(cè)）。

建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組，正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析，繪制雙色散點(diǎn)圖（two-color dot plot），F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo)，PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí)，活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光，早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光，晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>

2) 熒光顯微鏡檢測(cè)：

染色孵育后涂片，顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞，細(xì)胞核顯示紅色，膜上有綠色光環(huán)。
地衣芽孢桿菌小鼠鈣結(jié)合蛋白Anti-OR4B1 Antibody人二氧化(DAO)

針層孔菌屬大鼠巨噬替代激活相關(guān)化學(xué)因子1Anti-OR4C12 Antibody人二氧化(DAO)

假絲酵母人白介1αAnti-OR4C15 Antibody人環(huán)加氧2(COX-2)

皮狀假絲酵母小鼠透明質(zhì)結(jié)合蛋白Anti-OR4C3 Antibody人環(huán)加氧2(COX-2)

無(wú)小鼠嗜環(huán)蛋白/親環(huán)AAnti-OR4C16 Antibody人周期依賴性激5(CDK5)

土星形塞伯林德納氏酵母大鼠骨形成蛋白Anti-OR4D1 Antibody人周期依賴性激5(CDK5)

釀酒酵母人白介1可溶性受體ⅡAnti-OR4C6 Antibody人激肽釋放10(KLK 10)

粉紅擲孢酵母大鼠視黃結(jié)合蛋白4Anti-OR4D6 Antibody人激肽釋放10(KLK 10)

葡萄座腔菌人白介1可溶性受體ⅠAnti-OR4E2 Antibody人磷酯Cγ鏈(PLCγ1)

長(zhǎng)孢鏈霉菌小鼠骨形成蛋白6Anti-OR4F6 Antibody人磷酯Cγ鏈(PLCγ1)

費(fèi)希爾曲霉大鼠6前列腺F1aAnti-OR4F17 Antibody人神經(jīng)(NA)

瓣?duì)铐g革菌人白介16Anti-OR4F4 Antibody人神經(jīng)(NA)

枯草芽孢桿菌枯草亞種小鼠淋巴因子Anti-OR4K2 Antibody人磷酯酰肌特異性磷酯C(PIPLC)

膠孢大鼠戊糖Anti-OR4K14 Antibody人磷酯酰肌特異性磷酯C(PIPLC)

糞腸球菌人白介13Anti-OR4K17 Antibody人磷酯C(PLC)

Pseudoduganella小鼠抗尿激/血管加壓/精加壓Anti-OR4L1 Antibody人磷酯C(PLC)

松弛肽/松弛抗體葫蘆小叢殼人慢性B細(xì)胞白血病細(xì)胞

腎胺抗體#弗吉尼亞鏈霉菌mES小鼠胚胎干細(xì)胞*培養(yǎng)液

凋亡相關(guān)蛋白1抗體辣椒疫病BI 馬血清

環(huán)指蛋白165抗體#深藍(lán)鏈霉菌大鼠脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞
Wnt抑制劑(JW74)白囊耙齒 落葉松樹脂

冷杉囊孔 Koaburaside monomethyl ether

光黃絲膜 球花苦苷

Dyella  yeojuensis Kim et al.  鐵屎米酮

炭疽芽孢桿 5-Heptadecylresorcinol

釀酒酵母 (-)-白花前胡甲

產(chǎn)朊假絲酵母（未復(fù)核可換ACCC20060） 檉柳黃

米根霉 華良姜

深紅沙雷氏 cis-Methylisoeugenol

金黃殼囊孢 北升麻寧

林生假絲酵母 天名精內(nèi)酯酮

微小桿 3-鄰甲基槲皮

香菇 尖葉云香堿，吳茱萸

微白黃鏈霉 3,7-鄰二乙酰基短葉松

假紅緣層孔 3,5-Dihydroxy-4',7-dimethoxyflav