公司產(chǎn)品僅用于科研
細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個方面:
細(xì)胞生物學(xué)的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括:
①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究;
②生物膜與細(xì)胞器的研究;
③細(xì)胞骨架體系的研究;
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控;
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控;
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡);
⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化;
⑧細(xì)胞工程.
產(chǎn)品屬性:
中文名稱:SphK2抑制劑(K145鹽酸鹽)
英文名稱:K145 hydrochloride
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
發(fā)貨周期:1~3天
商品介紹:
K145鹽酸鹽是SphK2選擇性抑制劑,IC50為4.3μM,在10μM濃度時對SphK1無抑制性。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:1449240-68-9 別名:SphK2 inhibitor 純度:98.00% 分子量:384.92 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
實(shí)驗(yàn)報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
火紅色紅曲菌Alexa Fluor 350標(biāo)記的兔抗大鼠IgGAnti-WFDC2 Antibody脫氫(CHDH)
白黃阮繼生氏菌Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗大鼠IgGAnti-WFDC2 Antibody磷轉(zhuǎn)移1(CHPT1)
短芽孢桿菌羅丹明標(biāo)記的兔抗大鼠IgGAnti-WNT2 Antibody/乙磷轉(zhuǎn)移1(CEPT1)
傘菌假單胞菌辣根過氧化物標(biāo)記的兔抗大鼠IgGAnti-WNT2B Antibody膽固-25-羥化(CH25H)
泡囊短波單胞菌FITC標(biāo)記的兔抗大鼠IgGAnti-WNK1 Antibody單酰甘油脂肪(MGL)
雞新城疫血凝抑制試驗(yàn)用抗原(國家參考品)膠體金標(biāo)記的兔抗大鼠IgGAnti-Wnt2b Antibody單酰甘油-O-酰基轉(zhuǎn)移3(MOGAT3)
副短短芽孢桿菌堿性磷(AP)標(biāo)記的兔抗大鼠IgGAnti-WNT2B Antibody單酰甘油-O-?;D(zhuǎn)移2(MOGAT2)
少根根霉PE-Cy7標(biāo)記的兔抗大鼠IgMAnti-WNT3 Antibody單酰甘油-O-酰基轉(zhuǎn)移1(MOGAT1)
嗜熱脂肪地芽胞桿菌(Geobacillus stearothermophilus )ATCC 7953 *Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗大鼠IgMAnti-WNT4 Antibody單鏈選擇性單功能尿嘧啶DNA糖基化1(SMUG1)
豬瘟病間接ELISA抗體Alexa Fluor 555標(biāo)記的兔抗大鼠IgMAnti-WNT3A Antibody單核趨化蛋白4(MCP4)
細(xì)麗擬盤多毛孢Alexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗大鼠IgMAnti-WNT3A Antibody單核趨化蛋白3(MCP3)
釀酒酵母PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗大鼠IgMAnti-WNT4 Antibody單核趨化蛋白2(MCP2)
花楸盤多毛孢APC標(biāo)記的兔抗大鼠IgMAnti-WNT5A Antibody單核趨化蛋白1(MCP1)
果生鏈核盤菌Alexa Fluor 350標(biāo)記的兔抗大鼠IgMAnti-WNT5A Antibody(PB0087)單核巨噬分化關(guān)聯(lián)蛋白(MMA)
厄氏菌羅丹明標(biāo)記的兔抗大鼠IgMAnti-WNT7A Antibody戴帽蛋白肌Z系β(CAPZβ)
核盤菌FITC標(biāo)記的兔抗大鼠IgMAnti-WNT7B Antibody帶粘蛋白(ZAN)
前列腺性磷抗體米黑根毛霉小鼠冠狀動脈組織提取物
乳腺癌相關(guān)蛋白DRES17抗體隱甲藻小鼠牙乳頭組織提取物
輔肌動蛋白相關(guān)LIM蛋白抗體浮游球衣菌小鼠內(nèi)臟脂肪組織提取物
親環(huán)蛋白親環(huán)PPIB抗體Sphingobacteriumcomposti小鼠胎兒表皮組織提取物
SphK2抑制劑(K145鹽酸鹽)殺黃胞鏈霉 新烏頭原堿
長枝木霉 烏頭原堿
梭 苯甲酰次烏頭原堿
間型脈孢 苯甲酰新烏頭原堿
殺鮭氣單胞 苯甲酰烏頭原堿
新疆假諾卡氏 滇
豬鏈球分型血清參考品 血清型 SS8 印
植物乳桿植物亞種 次
塊 新
大腸埃希氏 KFY
泡盛曲霉 去甲斑蝥
Marivirga sp. 硬脂酸
草酸青霉 梔子
異常漢遜酵母 5-腺苷三磷酸二鈉鹽
金黃色葡萄球金黃亞種 5-腺苷二磷酸二鈉鹽