商品介紹:
SAR245409是一種有效的PI3K抑制劑,抑制p110α,p110β,p110γ和p110δ,IC50分別為39,113,9和43nM,也抑制DNA-PK(IC50=150nM)和mTOR(IC50=157nM)。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:934493-76-2 別名:Voxtalisib;XL765 純度:98.93% 分子量:270.29 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
PI3K抑制劑(SAR245409) | SAR245409 | 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg | 1~3天 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時,加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細(xì)胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
尖孢鐮刀菌Cy5標(biāo)記的兔抗猴IgMAnti-USP44 Antibody蛋白磷1調(diào)節(jié)因子亞基1B(PPP1R1B)
噬肌畢赤酵母Cy5.5標(biāo)記的兔抗猴IgMAnti-USP21 Antibody蛋白磷1調(diào)節(jié)因子亞基18(PPP1R18)
棒曲霉Cy7標(biāo)記的兔抗猴IgMAnti-VAMP7 Antibody蛋白酪磷樣蛋白A(PTPLA)
卷枝毛霉PE標(biāo)記的兔抗猴IgMAnti-USP25 Antibody蛋白酪磷受體R(PTPRR)
解脂復(fù)膜孢酵母APC標(biāo)記的兔抗猴IgMAnti-VAPB Antibody蛋白酪磷受體O(PTPRO)
運動節(jié)桿菌Alexa Fluor 350標(biāo)記的兔抗猴IgMAnti-VAPB Antibody蛋白酪磷受體N(PTPRN)
赤水太白山菌Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗猴IgMAnti-VASP Antibody蛋白酪磷受體K(PTPRK)
Ramlibacter sp.Alexa Fluor 555標(biāo)記的兔抗猴IgMAnti-VCAM1 Antibody蛋白酪磷受體H(PTPRH)
香菇生物標(biāo)記的兔抗猴IgMAnti-VCAM1 Antibody蛋白酪磷受體G(PTPRG)
馬紅球菌堿性磷(AP)標(biāo)記的兔抗猴IgMAnti-USP7 Antibody蛋白酪磷受體B(PTPRB)
韓國溶桿菌膠體金標(biāo)記的兔抗猴IgMAnti-VCAN Antibody(PB0480)蛋白酪磷ⅣA3(PTPⅣA3)
蘇云金芽孢桿菌辣根過氧化物標(biāo)記的兔抗猴IgMAnti-VCAM1 Antibody蛋白酪激2β(PTK2β)
Hymenobacter perfususFITC標(biāo)記的兔抗猴IgMAnti-VCL Antibody蛋白聚糖3(PRG3)
三棱孢小囊菌羅丹明標(biāo)記的兔抗猴IgMAnti-VCL Antibody蛋白激抑制因子γ(PKIγ)
假單胞菌羅丹明標(biāo)記的兔抗小鼠IgGAnti-VCL Antibody蛋白激抑制因子β(PKIβ)
豬霍亂沙門氏菌豬霍亂亞種膠體金標(biāo)記的兔抗小鼠IgGAnti-VCP Antibody蛋白激抑制因子α(PKIα)
PDZ結(jié)構(gòu)域PDZK4蛋白抗體馬紅球菌小鼠腦膜組織提取物
PDZ結(jié)構(gòu)域PDZK7蛋白抗體巧克力微桿菌小鼠腦動脈血管組織提取物
PDZ結(jié)構(gòu)域PDZK8蛋白抗體粘氏菌粘質(zhì)亞種小鼠甲狀腺組織提取物
蛋白酪激9抗體紅串紅球菌小鼠乳腺組織提取物
PI3K抑制劑(SAR245409)泡盛曲霉變種 偽原纖細(xì)薯蕷皂苷
亞利桑那沙門氏 原纖細(xì)薯蕷皂苷
榛色青霉 鴉膽子A;鴉膽子苦A
穗霉屬 鴉膽亭
輪枝孢屬 白射干
木蹄層孔 巴利森苷E
高盧蜜環(huán) 巴利森苷C
孟氏假單胞 巴利森苷B
疣孢 松柏苷
紅緣擬層孔 黃芩-7-甲
巴氏醋桿 異苦參酮
產(chǎn)氨短桿 靈芝酸C2
釀酒酵母 蘆西定
淡紫擬青霉 密力特苷
枯草芽孢桿 去氧土大黃苷;甲基虎杖苷