以下是細胞生物學(xué)試劑的詳細介紹:
商品介紹:
Ansamitocin P-3是一種微管(microtubule)抑制劑。Ansamitocin P-3是一種大環(huán)抗腫瘤抗生素。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:66584-72-3 別名:Antibiotic C 15003P3;Maytansinol butyrate;C15003P3 純度:98.0% 分子量:635.14 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養(yǎng)液,將細胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標,PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
糞鞘桿菌兔抗豚鼠IgMAnti-RIPK2 Antibody肌球蛋白重鏈2(MYH2)
根瘤菌兔抗馬IgGAnti-RMI2 Antibody肌球蛋白重鏈11(MYH11)
短芽孢桿菌屬兔抗人IgMAnti-RNASE4 Antibody肌球蛋白重鏈10(MYH10)
釀酒酵母兔抗猴IgMAnti-RNASE3 Antibody肌球蛋白重鏈1(MYH1)
短芽孢桿菌兔抗小鼠IgMAnti-RNASE1 Antibody肌球蛋白輕鏈激(MYLK)
菌生假絲酵母兔抗小鼠k鏈Anti-RND1 Antibody肌球蛋白輕鏈9(MYL9)
釀酒酵母兔抗長爪沙鼠IgGAnti-RNF169 Antibody肌球蛋白輕鏈2(MYL2)
炭黑曲霉兔抗水貂IgGAnti-RNF168 Antibody肌球蛋白輕鏈1(MYL1)
福氏志賀氏菌驢抗人IgGAnti-RNF31 Antibody肌球蛋白ⅩⅨ(MYO19)
釀酒酵母驢抗兔IgGAnti-RNF186 Antibody肌球蛋白ⅩⅧB(MYO18B)
斑玉蕈驢抗豚鼠IgGAnti-RNF123 Antibody肌球蛋白ⅩⅧA(MYO18A)
維多利亞維希尼克氏酵母鼠抗人IgG單克抗體Anti-RNF43 Antibody肌球蛋白ⅩⅥ(MYO16)
ArthrobacterPE-Cy5.5標記的兔抗犬IgM抗體Anti-RNF8 Antibody肌球蛋白ⅩⅤ(MYO15)
產(chǎn)氮假單胞菌PE-Cy7標記的兔抗犬IgM抗體Anti-ROBO1 Antibody肌球蛋白Ⅹ(MYO10)
產(chǎn)脲節(jié)桿菌Alexa Fluor 350標記的兔抗犬IgM抗體Anti-RNH1 Antibody肌球蛋白ⅨB(MYO9B)
鐮刀菌屬Alexa Fluor 488標記的兔抗犬IgM抗體Anti-ROCK2 Antibody(PB0428)肌球蛋白ⅨA(MYO9A)
核孔蛋白NUP160抗體藤倉赤霉小鼠嗅鞘細胞提取物
細胞核分離基因C蛋白抗體舊金山乳桿菌小鼠神經(jīng)元細胞提取物
痛覺調(diào)節(jié)肽NPFF抗體副干酪乳桿菌副干酪亞種小鼠小腦顆粒細胞提取物
神經(jīng)4抗體擬態(tài)弧菌小鼠腦膜細胞提取物
microtubule抑制劑(Ansamitocin P-3)大腸埃希 十四烷基磺酸鈉
大腸埃希 大戟因子L7a
香菇 大戟因子L2
串泡雙型毛霉短孢變種 2-苯乙
異常漢遜酵母 巖大戟內(nèi)酯E
枯草芽孢桿 巖大戟內(nèi)酯A
臭曲霉 糖精鈉
美澳型核果褐腐病 3-O-(2'E,4'E-癸二烯?;?巨大戟二萜
斯賓塞馬丁氏 3-O-(2'E,4'E-癸二烯?;?-20-O-乙酰巨大戟二萜
暗黑橄欖鏈霉 3-O-(2'E,4'Z-癸二烯?;?巨大戟二萜
薄層屬 伏立康唑
維也納原小單孢 3-O-(2'E,4'Z-癸二烯酰基)-20-O-乙酰巨大戟二萜
巨大芽孢桿 A 阿魏酸鈉
成團泛 3-O-(2'E,4'Z-癸二烯?;?-20-去氧巨大戟萜
硬結(jié)節(jié)桿 德拉沙星N-甲基葡萄糖鹽