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詳細(xì)介紹
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹：
中文名稱(chēng) | 英文名稱(chēng) | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
100T | 1～3天 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹：
Rhodamine 123染色液可用于細(xì)胞凋亡檢測(cè)，Rhodamine 123是一種細(xì)胞通透性的、陽(yáng)離子的熒光探針，容易被有活性的線粒體攝取，沒(méi)有細(xì)胞毒性，Rhodamine 123由于帶陽(yáng)離子所以當(dāng)線粒體膜電位存在的時(shí)候就會(huì)透過(guò)細(xì)胞膜在活細(xì)胞的線粒體內(nèi)聚集，發(fā)出黃綠色熒光，而當(dāng)膜電位下降的時(shí)候，聚集的Rhodamine 123就減少，從而發(fā)光強(qiáng)度降低。Rhodamine 123常與Cy5和AMCA (Aminomethylcoumarin Acetate)等組合進(jìn)行多色熒光分析,相互間無(wú)顏色交叉;分析細(xì)胞凋亡時(shí),可用Rhodamine 123 來(lái)檢測(cè)線粒體的膜電位,而用NAO來(lái)檢測(cè)線粒體結(jié)構(gòu)的完整性。Rhodamine 123，可用于對(duì)許多種細(xì)胞進(jìn)行染色，包括植物細(xì)胞和細(xì)菌。由于細(xì)胞內(nèi)ATP的量與Rhodamine 123的熒光強(qiáng)度之間有相關(guān)性，Rhodamine 123也可應(yīng)用于檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的ATP。 儲(chǔ)存條件：2-8℃避光保存。 長(zhǎng)期保存-20℃避光保存。 有效期：六個(gè)月。 |
操作步驟：
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer（10×）稀釋成1×Binding buffer工作液備用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml無(wú)菌去離子水）。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞，胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短，最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí)，加入細(xì)胞培養(yǎng)液，將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái)，轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后，加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌，離心收集細(xì)胞，共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重懸細(xì)胞，使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液（細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，輕輕混勻，室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè)：
染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)（1小時(shí)內(nèi)檢測(cè)）。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組，正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門(mén)的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析，繪制雙色散點(diǎn)圖（two-color dot plot），F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo)，PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí)，活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光，早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光，晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè)：
染色孵育后涂片，顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞，細(xì)胞核顯示紅色，膜上有綠色光環(huán)。
奧美沙坦酯英文名稱(chēng)： Epirubicin HCl磷化CREB-1抗體包裝5g
倍他洛爾英文名稱(chēng)： Eptifibatide Acetate磷化CREB-1抗體包裝1g
磺地平英文名稱(chēng)： Erlotinib hcl 磷化周期依賴性激6抗體包裝250mg
達(dá)比加群英文名稱(chēng)： Erlotinib hcl 原癌基因CBL2抗體包裝100mg
達(dá)比加群酯英文名稱(chēng)： Ertapenem sodium磷化原癌基因CBL2抗體包裝25mg
達(dá)肝/達(dá)替肝鈉英文名稱(chēng)： Estradiolβ鏈接相互作用蛋白1抗體包裝25g
丹曲林鈉英文名稱(chēng)： Estradiol磷化β鏈接相互作用蛋白1抗體包裝5g
單硝異山梨酯英文名稱(chēng)： Estriol磷化β 連環(huán)蛋白抗體包裝1g
厄貝沙坦英文名稱(chēng)： Estriol葉綠體蛋白抗體（植物）包裝1g
非洛地平/非地平英文名稱(chēng)： Etoposide磷化后期促進(jìn)復(fù)合蛋白3抗體包裝5g
伐他汀鈉英文名稱(chēng)： Etoposide磷化絲切蛋白抗體包裝100g
富馬比索洛爾英文名稱(chēng)： Etoposide磷化絲切蛋白抗體包裝25g
肝鈉/肝磷脂鈉鹽英文名稱(chēng)： Exemestane磷化周期檢測(cè)點(diǎn)激2抗體包裝5g
環(huán)貝特英文名稱(chēng)： Exenatide Acetate/Exendin-4磷化分裂周期蛋白25抗體包裝10MG
吉非羅齊英文名稱(chēng)： Finasteride磷化分裂周期蛋白25抗體包裝1g
米曲霉Aspergillus│oryzae 質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定試劑盒異鼠李;Isorhamnetin
青霉Penicillium│sp. 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR,USP31一氧化碳血紅蛋白試劑盒羽扇豆;Lupeol
彎曲假單胞菌Pseudomonas│geniculata 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品一氧化氮試劑盒異去蟛蜞菊內(nèi)酯;Demethylwed
Rhodamine 123染色試劑盒大腸埃希氏桿 磺氯噠鼻病Elisa
海神弧 環(huán)氧大豆油Elisa
谷氨酸棒桿 高效氟氯菊酯P22cr蛋白Elisa
茯苓 呋喃唑酮鈣蛋白抑Elisa
運(yùn)動(dòng)發(fā)酵單孢* 雄烯二酮鈣蛋白Elisa
短裙竹蓀東北變種* 二十六烷CD10分子Elisa
金黃殼囊孢 環(huán)唑CD26分子Elisa
乳酸桿 美托洛爾核轉(zhuǎn)錄因子p50Elisa
長(zhǎng)枝木霉 頭孢呋辛鈉干擾調(diào)節(jié)因子3Elisa
黑平188 氯己定中性粒透明質(zhì)酸Elisa
淺灰綠色鏈霉 亞麻酸金屬蛋白組織抑制因子Elisa
白肉迷孔 鄰苯二甲酸單(2-乙基己基)酯整合α6Elisa
印度毛殼 芬苯達(dá)唑整合β4Elisa
煙管 2-氯-3-甲基吡整合β5Elisa
蘋(píng)果鏈格孢（蘋(píng)果斑點(diǎn)落葉病） 環(huán)吡司整合β3Elisa
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