以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
英文名稱:JSH-23 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg JSH-23是一種NF-κB抑制劑,IC50值為7.1μM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):749886-87-1 純度:99.10% 分子量:240.34 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長(zhǎng)或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
雜色曲霉鵝細(xì)小病GPV抗體Human TOMM6 ELISA Kit大鼠絨毛膜促性腺激β(β-CG)免疫試劑盒
鉛色青霉胃泌/蛙皮抗體Human TOMM34 ELISA Kit大鼠絨毛膜促性腺激(CG)免疫試劑盒
大麗輪枝孢3-磷甘油脫氫(兔來源免疫組化用抗體)Human MT ELISA Kit大鼠相關(guān)血漿蛋白A(PAPP-A)免疫試劑盒
余速測(cè)盒(檢測(cè)范圍0~1mg/L)膠質(zhì)源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子抗體Human TOMM7 ELISA Kit大鼠熱休克因子1(HSF1)免疫試劑盒
根瘤菌β半乳糖苷抗體Human TOP3A ELISA Kit大鼠熱休克蛋白糖蛋白96(HSP gp96)免疫試劑盒
大腸埃希菌gamma基丁B型受體1抗體Human TNS1 ELISA Kit大鼠熱休克蛋白90-alpha(Hsp90aa1/Hsp86/Hspca)免疫試劑盒
細(xì)黃鏈霉菌乳糖變種G蛋白/鳥苷結(jié)合蛋白抗體Human TNIP2 ELISA Kit大鼠熱休克蛋白70(HSP-70)免疫試劑盒
托姆青霉GDNF家族受體α4抗體 GDNFRα4Human TNIP1 ELISA Kit大鼠熱休克蛋白60(Hsp-60)免疫試劑盒
克魯斯假絲酵母神經(jīng)節(jié)肽抗體Human TNS3 ELISA Kit大鼠熱休克蛋白47(HSP47)免疫試劑盒
鳳尾菇谷氧還蛋白/巰基轉(zhuǎn)移抗體Human TNS4 ELISA Kit大鼠熱休克蛋白40(HSP-40)免疫試劑盒
大豆慢生根瘤菌G蛋白偶聯(lián)受體GPR113蛋白抗體Human TMOD3 ELISA Kit大鼠熱休克蛋白27(HSP-27)免疫試劑盒
醋鈣不動(dòng)桿菌甘肽受體1抗體Human MCHR2(Melanin-concentRating hormone receptor 2) ELISA Kit大鼠熱休克蛋白20(HSP-20)免疫試劑盒
雙孢蘑菇生長(zhǎng)抑制DNA損傷基因34抗體Human TNK1 ELISA Kit大鼠缺血修飾白蛋白(IMA)免疫試劑盒
發(fā)酵乳桿菌生長(zhǎng)分化因子1抗體Human TNP1 ELISA Kit大鼠固(ALD)免疫試劑盒
柳巴克利酵母葡萄糖激抗體Human TMPRSS5 ELISA Kit大鼠全段甲狀旁腺(i-PTH)免疫試劑盒
汞對(duì)照液G蛋白偶聯(lián)受體78抗體Human EEF1A1(Elongation factor 1-alpha 1) ELISA Kit大鼠去乙?;囸I激(dGHRL)免疫試劑盒
青霉屬Penicillium│sp. 質(zhì)量規(guī)格:光譜純 ,≥99%甜橙黃
: HBUM80981資源名稱: 鏈霉菌 質(zhì)量規(guī)格:for spectroscopy,≥99.5%番瀉苷元B
山茶刺盤孢Colletotrichum│coccodes (Wallr.) S. Hughes 質(zhì)量規(guī)格:SP番瀉苷元A
NF-κB抑制劑(JSH-23)大腸埃希氏桿 二叔丁基化膦α-葡萄糖苷Elisa
腐皮殼 氟化釔酪氨酸羥化Elisa
假單胞 氟化鈧抗肽Elisa
小麥紋枯 氟化鐠(III)糖原合成激Elisa
熒光威克酵母 氟化釹錨蛋白Elisa
釀酒酵母 1-BOC--4-甲雌二Elisa
Shinella kummerowiae Lin et al. B-三溴氮化羧肽BElisa
無色桿屬 氟化鋱(III)胰蛋白Elisa
產(chǎn)蝦青鞘鞍單胞 2-庚基環(huán)戊酮血糖Elisa
針猴頭 偏酸鈣海藻糖合成Elisa
庫爾勒海洋桿 4-甲基-5-噻唑乙α-淀粉Elisa
外外安德倫茨氏 TOTU羥甲基戊二酸單酰還原Elisa
巴西果小克銀漢霉 化金羥甲基戊二酸單酰合成Elisa
指狀青霉 2-乙酰-5-甲基噻吩氨肽Elisa
黃須腹 二糠基硫磷酸化AKT蛋白Elisa