詳細(xì)介紹
使用方法:
測(cè)定法的靈敏度來自作為報(bào)告的酶。酶是一種有機(jī)催化劑,很少量的酶即可誘導(dǎo)大量的催化反應(yīng),產(chǎn)生可供觀察的顯色反應(yīng)現(xiàn)象。因此該體系常被稱為酶放大體系。
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。 24μg/ml 5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
12μg/ml 4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
6μg/ml 3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
3μg/ml 2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
1.5μg/ml 1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2. 加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。|
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
ELISA Kit檢測(cè)試劑盒優(yōu)點(diǎn)多,更加方便我們的科研學(xué)者進(jìn)行科學(xué)實(shí)驗(yàn),是科研實(shí)驗(yàn)的好伙伴。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號(hào) |
HBsAb ELISA Kit | GOY-E99830 |
實(shí)驗(yàn)流程:
1. 實(shí)驗(yàn)前標(biāo)準(zhǔn)品、試劑及樣本的準(zhǔn)備;
2. 加樣(標(biāo)準(zhǔn)品及樣本)100µL,37°C孵育1小時(shí);
3. 吸棄,加檢測(cè)溶液A100µL,37°C孵育1小時(shí);
4. 洗板3次;
5. 加檢測(cè)溶液B100µL,37°C孵育30分鐘;
6. 洗板5次;
7. 加TMB底物90µL,37°C孵育10-20分鐘;
8. 加終止液50µL,立即450nm讀數(shù)。
樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備:
ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(2)血漿:
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
(4)細(xì)胞培養(yǎng)上清:
檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。
(5)培養(yǎng)細(xì)胞
檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(6)組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用。
注意事項(xiàng):
1.加樣:
①實(shí)驗(yàn)樣本過多時(shí),可分批次操作,以減少實(shí)驗(yàn)時(shí)間延長(zhǎng)造成的誤差;
②加酶試劑后,用吸水紙吸干孔外試劑;
③作定量試驗(yàn)時(shí),使用加樣器加注試劑,并經(jīng)常校正其準(zhǔn)確性,此外,要做到一份樣本一個(gè)移液頭,防止交叉污染。
2.溫育:
①如有兩種溫度,盡量使用較低的溫育溫度、較長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間的條件;
②用1個(gè)小溫度計(jì)放置在板孔反應(yīng)液中測(cè)量觀察;
③96孔板周圍孔與中心孔在溫育中的熱力學(xué)梯度會(huì)造成“邊緣效應(yīng)”,因此盡量采用水浴;
3.洗板:
①手工洗板時(shí),拍板時(shí)要垂直,避免交叉污染,用力不能過猛,防止抗原抗體復(fù)合物脫離;
②洗板機(jī)洗板時(shí)應(yīng)經(jīng)常檢查沖洗頭是否通暢,若被雜物堵塞時(shí)可用注射器針頭挑出;
③為了洗滌效果好,實(shí)驗(yàn)室可采用機(jī)器與人工洗滌相結(jié)合的方法,在機(jī)器洗滌后再進(jìn)行人工洗板1-2次,或適當(dāng)增加洗板的次數(shù);
4.顯色:
ELISA試劑盒中,如以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物,則提供的底物為A和B兩瓶應(yīng)用液;如以鄰苯二胺(OPD)為底物,則試劑盒提供鄰苯二胺片劑或粉劑。顯色反應(yīng)條件為37℃或室溫反應(yīng)15-30 min。以鄰苯二胺(OPD)為底物的試劑,要臨用前30 min配制且必須避光。以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物的試劑則不需避光,但A、B液應(yīng)盡量避免接觸金屬器械。
5.判定:
讀取結(jié)果要在15-30 min內(nèi)完成,定性測(cè)定用肉眼判讀試驗(yàn)結(jié)果時(shí),反應(yīng)板應(yīng)水平距離白色背景10-15 cm;定量測(cè)定時(shí)用酶標(biāo)儀讀取結(jié)果,酶標(biāo)儀不應(yīng)置于陽光或強(qiáng)光照射下,需先預(yù)熱15-30 min再進(jìn)行測(cè)試。
大鼠巨噬細(xì)胞炎癥蛋白1β(MIP-1β)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
大鼠抵抗素(RETN)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶1(MMP-1)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶3(MMP-3)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶2(MMP-2)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶24(MMP-24)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶7(MMP-7)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶8(MMP-8)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9) 酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
大鼠血管生成素(ANG)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
大鼠促血管生成素1(ANG1)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
大鼠高鐵血紅蛋白(MHB)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
大鼠單核細(xì)胞趨化蛋白1(MCP-1)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
大鼠晚期糖基化終末產(chǎn)物受體(AGER)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
HBsAb抗乙型肝炎病毒表面抗體ELISA KitMCSF/M-CSF 巨噬細(xì)胞克隆刺激因子抗體 規(guī)格: 0.1ml
P95/NBS1 DNA修復(fù)蛋白NBS1抗體 規(guī)格: 0.2ml
CD38 CD38抗體 規(guī)格: 0.1ml
Rabbit Anti-MK IgM/Cy5 Cy5標(biāo)記的兔抗猴IgM 規(guī)格: 0.1ml
DENND1B DENND1B蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
Phospho-NMDAR1(Ser890) 磷酸化谷氨酸受體1抗體 規(guī)格: 0.1ml
HLA B/HLA G 人類白細(xì)胞抗原G抗體 規(guī)格: 0.1ml
CK18 細(xì)胞角蛋白18抗體(C端) 規(guī)格: 0.1ml
Rabbit Anti-Bovine IgM/PE PE標(biāo)記的兔抗牛IgM 規(guī)格: 0.1ml
P-selectin/CD62p P選擇素抗體 規(guī)格: 0.1ml
TRIM5α/RNF88 環(huán)指蛋白88抗體 規(guī)格: 0.2ml
KIF15 驅(qū)動(dòng)蛋白家族成員15抗體 規(guī)格: 0.2ml
Phospho-Lyn (Tyr507) 膜相關(guān)蛋白酪氨酸激酶Lyn抗體 規(guī)格: 0.1ml
HLA DM 組織相容性復(fù)合體α抗體 規(guī)格: 0.2ml