以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
Polo-like kinase1抑制劑 | GSK461364 | 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg | 1~3天 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
GSK461364是一種有效的Polo-like kinase1抑制劑,Ki值為2.2nM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:929095-18-1 別名:GSK461364A 純度:99.74% 分子量:543.6 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時,加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細(xì)胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
小葉相思根瘤菌磷化絲裂原活化蛋白激MKK3/6抗體Human MINK1 ELISA Kit免疫球蛋白樣轉(zhuǎn)錄體受體(ILTsR/LIR/CD85)
束型青霉磷化絲裂原活化蛋白激MKK6抗體Human MIPEP ELISA Kit免疫球蛋白輕鏈lambda(λ-IgLC)
天津李時珍氏菌嗜粒趨化蛋白22抗體Human MIPOL1 ELISA Kit免疫球蛋白輕鏈kappa(κ-IgLC)
金格桿菌甲硫腦啡肽抗體Human MKL1(MKL/myocardin-like protein 1) ELISA Kit免疫球蛋白結(jié)合蛋白(BIP)
橄欖色硬膜鏈霉菌抗體Human MITD1 ELISA Kit免疫球蛋白γ-1鏈C區(qū)(IGHGI)
粉樹孢基質(zhì)金屬蛋白9抗體Human Mitofilin ELISA Kit免疫球蛋白M(IgM)
Sphingomonas panni 原癌基因M-ras抗體Human F12(Coagulation factor XII) ELISA Kit免疫球蛋白j鏈(Ig-j)
魯氏接合酵母單核趨化蛋白1抗體Human MKNK2 ELISA Kit免疫球蛋白G4(IgG4)
雙孢蘑菇(白蘑菇、洋蘑菇)抗體Human MFN1 ELISA Kit免疫球蛋白G3(IgG3)
漢遜德巴利酵母雞支原體抗體Human METT10D ELISA Kit免疫球蛋白G1(IgG1)
蘇云金芽胞桿菌熊本亞種線粒體轉(zhuǎn)錄因子1抗體Human MED4 ELISA Kit免疫球蛋白G(IgG)
荔枝有絲分裂抑制缺陷蛋白1抗體Human MED6 ELISA Kit免疫球蛋白G Fc片段(Fcγ)
東方伊薩酵母膜相關(guān)環(huán)指蛋白10抗體Human MEF2A ELISA Kit免疫球蛋白G Fc段受體Ⅲ(FcγRⅢ/CD16)
色串孢屬粘膜相關(guān)淋巴組織淋巴瘤轉(zhuǎn)運蛋白1抗體Human MED8 ELISA Kit免疫球蛋白G Fc段受體Ⅱ(FcγRⅡ/CD32)
棲果盤孢粘膜血管定居因子抗體Human MEIS3 ELISA Kit免疫球蛋白G Fc段受體Ⅰ(FcγRⅠ/CD64)
停滯棒桿菌抑癌基因抗體Human MUC5B(Mucin-5B) ELISA Kit免疫球蛋白E(IgE)
粗皮側(cè)耳(平菇)Pleurotus│ostreatus (Jacq.) P. Kumm. 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR鹽小檗堿
基桿菌Phenylobacterium│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98%,標(biāo)準(zhǔn)品鹽青藤堿
幽門螺桿菌Helicobacter│pylori 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR巖白菜
Polo-like kinase1抑制劑大腸桿 4,5-二基-2-氨基咪唑布魯氏桿Elisa
毛柄(金針菇) 4-甲苯磺酰異酸酯包蟲病IgG抗體Elisa
嗜糞細(xì)薄 4-基-4'-戊基聯(lián)苯磷酸二酯5Elisa
蘇云金芽孢桿九州亞種 3-巰基-2-丁酮程序性死亡配體-1抗體Elisa
擴展鐮孢 (S)-(+)-酮基蒎酸尿酸Elisa
根瘤 1-溴-4-三氟甲氧基苯沙門氏抗體Elisa
苦白蹄 4-正基環(huán)己酮布魯氏IgG抗體Elisa
福氏志賀氏 4-氟苯乙烯溶Elisa
黃曲霉 對氟血管內(nèi)皮生長因子BElisa
運動節(jié)桿 3-氟-4-羥基苯甲促甲狀腺釋放Elisa
賴氨酸芽孢桿 6-氨基-1-己喹啉酸Elisa
潮汐科維爾氏 3-氟苯甲干因子Elisa
蘇云金芽孢桿 對氟苯甲酰肝生長因子Elisa
綠色木霉 2-氟-4-甲酸神經(jīng)氨酸Elisa
茶樹菇 2-氟異煙酸球蛋白G2aElisa